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利用粘红酵母静息细胞高效转化7-ACA成7-ADAC 孙馨蔚郭长伟李继安刘壶 (上海医药工业研究院上海200040) 获得纯度98％的7-ADAC，反应总摩尔收率为88％。 关键词粘红酵母； 7-ACA；7-ADAC 头孢菌素类抗生素是目前用量居世界药市首位的抗生素。目前，临床上使用的头孢类抗生素主 acid)系列衍生物，另一类是7-ACA 要分两大类：一类是7-ADCA(7．aminodeacetoxycephalosporanic Acid)系列衍生物及其C3．功能化系列衍生物【1】。其中C3．功能化系列衍生 (7一aminocephalosporanic 物主要有头孢呋辛、头孢克罗、头孢噻肟等【2】。作为进行C3．功能化衍生的重要中间体，7一氨基一3一 去乙酰基头孢烷酸(7一aminodeacetylcephalosporanic 较苛刻【4】。本文参照国外文献【5’6]，利用粘红酵母静息细胞，在微碱性pH及常温的条件下将7-ACA 生产各种重要的半合成头孢菌素类抗生素提供了有利条件。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1菌种、试剂与仪器： 粘红酵母(Rhodotorula glutinis，上海医工院生物制药部)； 原料7-ACA及化学合成的7-ADAC(纯度98．5％)(浙江海正药业有限公司)； J 1100)、离心机(Beckman25)； HPLC(Agilent 60 硅胶板(Merck，SilicaF254)； gel 酵母粉、蛋白胨为OXOID公司进口分装，其余所用试剂均为分析纯。 1．1．2培养基与培养条件： 0．6， 斜面培养基(％)：葡萄糖2．0，蛋白胨2．5，KH2P04K2I-IP04 0．05， 0．6，MgS04．7H20 6．5。25C，培养72h。 pH 发酵培养基(％)：葡萄糖1．0，蛋白胨1．0，KH2P040．5，K2HP04 6．5。25C，振荡 0．5，pH (230r／min)培养72h。 收稿日期l2005．03．25 作者简介t孙馨蔚(1977)，女，硕士研究生，专业方向：微生物与生化药学。 Tel：021442E—maih xwsun77@163．com 252 1．2方法 1．2．1粘红酵母的培养与菌体收集 粘红酵母培养72h后，离心(4000 2．899，H3803 8．25)洗涤2次。 3．009，加水配至1000ml，pH 1．2．2 7-ACA的转化 将洗涤后的粘红酵母静息细胞加入底物溶液中，混合均匀，以磁力搅拌器搅拌反应，反应温度 25。C，以4mol／L氨水维持反应的pH为8．25左右。定时取样检测反应进度。 1．2．3产物的分离提取 4．20的水和丙酮洗涤沉淀，真空干燥。 使产物沉淀；4。C冰箱静置过夜，过滤，依次用pH 1．2．4分析与测定 1．2．4．1 TLC检测 展开剂组分：乙醇：正丁醇：水(2：4：4) 点样后展开，烘干，碘熏蒸显色 1．2．4．2HPLC检测 样品的处理：取反应液1001xl，以上述硼酸缓冲液稀释50倍，加等体积的甲醇，混匀，离心 柱温：30℃；流速：0．8ml／min检测波长：254nm；进样量：0．5山 转化率c％，=蹁