基因枪法获得逆境诱导转录因子DREB1A转基因小麦地研究.pdfVIP

2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集 基因枪法获得逆境诱导转录因子DREBlA转基因小麦的研究’ 刘录祥1赵林姝1梁欣欣1郑企成1刘强2王晶1郭会君1 赵世荣1陈文华1 术系．北京100084) 摘薹 以小麦品种H6756和藁城8901作为基因枪转化的靶材料，取其护颖至雌雄蕊原幕形成期的幼穗．用含逆境 Basta溶液 的培养基j：进行筛选。得到的抗性愈伤组织在不含Basta溶液的培养基上再生培养，获得218颗再生植株。n】问涂 抹浓度为100 13株．藁城8901 I株。 7 关键词转录闭子；DREBIA基因；基因枪转化；转基因小麦 近年来，我国小麦因干旱、盐渍、低温等逆境造成的年均受灾面积高达20％～25％。干旱、盐渍、低 温等逆境因子已成为大幅度提高我国小麦单产及总产水平的主要限制因素之一。小麦抗逆性属数量性状， 常规育种改良方法由于资源匮乏受到挑战。植物基因工程技术成为解决这一难题的新途径。 迄今应_I}j于小麦等植物抗逆性基因工程改良的外源目的基因依据其产物的作用可分为两大类：第1类 国内外厂一泛重视，研究得比较透彻，并已获得了一些耐旱耐盐性得到改善的转基因植物“’“。第1I类基因 性及基冈产物调控作用的研究已成为植物分子生物学领域的一个前沿内容而备受关注，其中DREB (dehydrationresponsiveelementbinding)转录因子的研究极为活跃并取得显著进展p】。 DREB转录因子可以调控多个与植物干旱、高盐及低温耐性有关的功能基因的表达。因此，利用转录因子 转基因拟南芥植物中，DREBIA在正常条件下或在胁迫条件下的超表达，促使多个与胁迫相关基因在正常 条件F也能表达，或在胁迫条件下表达进一步增强，从而使植株对干旱、高盐及低温的耐性得到全面的显 著增强。本研究主要目的是将DREBIA基因导入小麦，以期得到抗逆性综合改良的转基因小麦。 1材料与方法 1．1檀物材料准备 参照研究建立的克服基因型障碍的小麦遗传转化受体系统”1。选择综合农艺性状较好的H6756和藁 城8901小麦(Triticumaesfivum L．)为试验材料。取田间护颖至雌雄蕊原基形成期的幼穗，用O．I％HgCI， 消毒，无菌水冲洗厉接种。愈伤组织的诱导和继代培养基为MS附加2rag／12．4．D的固体培养基。 1．2植物表达载体构建 基金项目：同家863课题(2001AA21212I)资助 作者简介： 刘录样．男t 1965年出生．1蜓西人，研究员，土要从事作物诱发突变与生物技术育种研究 net．删 Tel：010-Email：luxiang@263 ● 59l !殳塑笙全旦笪塑望堡童壁堂查婴塑垒笙苎篓 I和SacI切卜．)，构建由ubi启动子驱动的DREBIA基闪的表达载体(图1)。 HindⅢ SmaI sasI HindⅢ BJmHI 圈l pAHC25质粒结构图 1．3基因枪转化及抗性愈伤组织筛选 将幼穗及其胚性愈伤组织摆放在含培养基的培养皿中央，JH 闪枪轰卉。微粒子弹的制备参照基冈枪操作手册进行。可裂膜距微粒载体之间的距离山3cm，轰．Mf、力为 1100psi，真空度为27．28pa，转化材料与微弹之间的距离为7cm。 上，之后转至普通愈伤组织诱导培养基上恢复培养。经诱导筛选培养基(Ms+0．2m昏，L2,4一D)附加Basta 筛选后，移至MS再生培养基。在25℃14N10h光照培养后，再生绿苗转至生根培养基上(1／2MS+0