利用液相基质进行MALDI-TOF质谱定量分析地研究.pdfVIP

2001年增刊 分析试脸室 yol02 SupPI. 2001年11月 Chinesejournalof冉nal丫t主cal比boratroy 2佣1一11 利用液相基质进行MADLI一TFO质谱定量分析的研究 熊少样*‘，陈文章’，蒲 丹’，辛 斌’，王光辉’ (’中国科学院化学研究所分子科学中心北京质谱中心北京10。。80 2中国矿业大学化工与环境工程系北京1。。80)3 摘要:本文考察了利用液相制样法建立了基质辅助激光解吸电离飞行时间质讲的定量分析方法 发现当利用液相制样法 所得定全分析结果优于固相制样法的姑果. 关健词:基质描劝激光解吸电离飞行时间质语;液相侧样法;定贡 近年来，基质辅助激光解吸电离飞行时间质 2 结果与讨论 谱 (袱DL卜丁CF一肥)得到了迅速发展，并且广泛 同固相制样法相比，液相制样法的一个明显 应用于生物、化学、医学等领域4]{1.在MALDI一FO 优点是检测信号具有很高的德定性、可重复性。 中，通常利用固相方法制备样品，虽操作简单，但 该性质无疑成为幽LDI~TOF定t分析的美础。表1 受多种可变因紊影响，信号十分不稳定，随着激 是以DHB为墓质，分别用固相制样法和液相制样法 光不断电离样品，样品性质不断变化、样品分子 对p一DC、丫一0的混和洛液(重t比p一D:丫弋D 数目不断减少，信号不断减弱，限制了以LDI翻5在 科:)5的侧定结果。可以发现液相制样法的信号 定量方面的应用，通常加入性质相近的内标物质， 稳定性远优于固相制样法的信号稳定性。虽然p 通过信号的相对强度]l’，或利用同位素模拟法定量 一Dc与丫一D同为环糊精物质，性质较接近，但是 s1[。但是由于结晶过程受多种可变因素影响，结晶 在固相制样结晶过程受多种因素影响，不可能在 过程中，样品、内标、基质分子不一定能混和均 样品靶上任何一点，基质、内标与样品都混合均 匀，因此不能从根本上解决信号不毯定的问题。 匀，所以信号的重现性很差，在采用乙醉重结晶 本文利用液相基质体系，以多肤类物质和环糊精 后，稳定性虽有所改善，但仍远不及滚相制样法。 物质为例，通过加入性质相近的内标物质，进行 而液相制样法由于样品、内标与墓质以液体形式 M从DleeTOF的定量研究，发现液相制样法具有较好 存在，能混和均匀。所以重复性、稳定性优于固 的持续性、稳定性、重现性。而且样品与内标的 相制样法.分别以Hc以和HDB为基质。采用液相制 信号强度比例，仅与二者的浓度比例有关，与所选 样方法，所得的二者信号稳定性无明显差别:但 用的荃质体系、样品的浓度无关。 是用固相制样法，以HDB为荃质的信号稳定性远优 苦实验部分 于以CH以为荃质的信号毯定性。可知固相制样方 Biflxelll型基质辅助激光解吸电离飞行时 法依赖于基质体系，而液相制样方法基质对其无 间质谱仪 (BrukerDalton主csCo卜USA)，氮激 明显影响.固定样品与内标比例.改变浓度的实 光器，波长处337伽，采用正离子反射检测模式。 验结果表明:浓度、荃质与样品的比例对最终结 三氨荃哇琳 A3〔Q)、2、5一二经基苯甲酸(HDB)、 果影响甚微，影响信号强度比与稳定性的因素， 。一帆荃肉桂酸 (Q犯八)、三氛乙酸 (TFA)、血 仅仅是样品与内标的浓度比。 固定内标浓度. 管紧张肤1(Angl)、血管紧张肤n(Angll)为 改变样品浓度，测定样品与内标的信号强度比， jss.公司产品;甘油 (分析纯);三蒸水、乙 所得的线性范围和工作曲线的实验结果表明:以 睛 AC〔N，光谱纯):p一环糊精 (p~CD) 、丫- 不同浓度样品所得到的信号弓度比，对样品浓度 环糊精(丫一Dc)为本实验室收集样品(纯度95% 作工作曲线，线性范困在一个数t级以上，线性 以上)。 CHCA、A3Q溶于甘油(重t比1:4: 相关系数为0.9965，较好地解梦t分析的要 6)，0旧溶于甘油形成饱和溶液，D阳溶于ACN 求。 与H刃(AcN与切的体积比为2:1，含1%作八)的