海藻糖在高产甘油的克鲁氏假丝酵母中的积累的研究.pdfVIP

海藻糖在高产甘油的克鲁氏假丝酵母中的积累研究 张岩-粱萌2任灏翔2刘德华z 0) (1中科院化工冶金研究所10008 (2清华大学化工系应用化学研究所100084) 抽要研究了产甘油的耐高渗酵母在热刺激、高渗透压和乙醇等逆环境中海藻糖的积累情况．结果 袁明．克鲁氏假丝酵母在不利环境生长时，胞内海藻糖会大量产生，随着对环境的适应，海藻糖咒 套迅速的被降解．在不同渗透压环境T$-长的酵母细胞被转穆到更高的渗透压环境中时，细胞存活 量与原来所赴渗透压的高低有关． 1前言 生物细胞中广泛存在【Il。海藻糖因在食品、生物技术、生物活性物质保存等方面所表现出的特殊 功能而被广泛的关注。目前，人们认为海藻糖是作为一种储备性碳源和作为胁迫环境下的细胞保 护剂出现的㈣。Thevelein报道了在酵母稳定期细胞和孢子等休止细胞，或在培养基氮源或碳源 缺乏时会有海藻糖作为储备性碳源大量产生【1J；但是在快速生长的细胞中含量很低。海藻糖具有 在饥饿，干燥．高温，高渗透压及有毒试剂的胁迫环境下保护细胞膜和生物大分子生物活性的特 殊功能，被普遍认为是一种细胞保护剂。对于常见的酿酒酵母中海藻糖的积累规律已经有了很多 的研究．但是作为本身的生存环境就很特殊的耐高渗酵母却尚未见到相关的报道。我们以前的工 作表明15]，熟冲击和高渗透压的环境能够在很大程度上提高耐高渗酵母发酵产生甘油的能力。甘 油和海藻糖都有保护细胞抵抗外界不利环境的功能，本文研究发酵过程中海藻糖积累的规律对耐 高渗酵母的甘油发酵及对细胞耐受不利环境的机理研究都有重要的启示作用。 2材料和方法 2．I材料 b-usei)。 实验菌株：耐高渗酵母菌ICM．Y-05(Candlda 培养基：种子培养基组成为：葡萄糖10％，玉米浆0．3％，尿素O．3％：发酵培养基组成为：葡 萄糖30％，玉米浆0．25％，尿素O．25％。初始pH均为4．0--4．5。 2．2方法 2．2．1热冲击0aeat-schock)操作 摇床中，维持设定的热冲击时间．而后取样进行测定。 2．2．2葡萄糖和甘油分析 用菲林试剂测定葡萄糖浓度．用高碘酸氧化法分析甘油浓度。 2,2．3菌体干重测定 在80℃烘箱中烘至恒重，称量细胞干重。 2,2．4海藻糖提取及测定 酸葸酮法测定其中的海藻糖。 210 3结果和讨论 3．1热冲击实验 将酵母在35C正常培养24h，当细胞达到稳定生长期时，转移到45℃水浴摇床中进行1～5h 热冲击，结果如图1所示。与没有进行热冲击的对照样而言，熟冲击后的胞内海藻糖含量都有一 定程度的提高，而热刺激lh的海藻糖含量最高。与对照样相比增加了3倍多。 j||ljjj||j||0 d l || _ || 厂_．厂 r_厂_厂_^ 3．2高渗透压环境下海藻糖的积累 3．2．1不同渗透压对酵母细胞发酵结果的影响 为改变不同的渗透压，我们在基本发酵培养基中加入不同浓度的NaCI，在发酵过程中间隔 一定时间取样进行分析测定．同时考虑到培养基中葡萄糖浓度太高。会影响对加盐作用的研究， 将培养基中的葡萄糖定为15％。结果如图2所示。细胞的的生长趋势都是相同的，即在前12h为 指数生长期，菌体的数量明显增加，在以后的时间里，菌体呈缓慢增长的趋势。未加盐的对照样 各个时间点上都是细胞浓度最高，说明盐的加入对细胞的生长有明显抑止作用。盐浓度越高对菌 体生长的抑制越严重。与不加盐的对照样相比，所有加盐培养基中甘油浓度均有所提高，其中 1．0MNaOI培养液中甘油产量最高。 酵母在不同渗透压环境下生长时，胞内海藻糖的积累呈现明显的规律性：在8小时内迅速 达到最高量，而后逐渐减少，当细胞的生长达到稳定期时海藻糖已经降到了很低的程度。对于没 有加盐的对照样，开始也会有一个较低韵海藻糖峰值出现．说明发酵培养基中较高的葡萄糖浓度 也会引起胞内海藻糖一定程度的提高。我们同时研究了培养基中加入KCI的情况，结果同NaCI 相似，只是对于相同浓度的这两种不同盐．在Na