肾母细胞瘤RassF1A基因启动子区甲基化的研究.pdfVIP

要因素，本组全部病人采用根治性患肾切除术治疗，术后经不规则化疗，未行 放疗。化疗药物有长春新碱、环磷酰胺、阿霉素、顺铂。手术完整切除病灶与 疗效的关系在本组病人显得非常重要。 肾母细胞瘤RassFlA基因启动子区甲基化研究 中国医科大学第二临床学院dJI,Jt科 张宝欣王常林高红侯英朱贝贝蔡炜嵩王浩 Gene，TSG)。 RassFlA基因是近年发现的肿瘤抑制基因(Tumor Suppressor 其蛋白参与Ras途径信号传导、DNA损伤修复和诱导凋亡。启动子区高甲基化 导致基因灭活，与许多肿瘤，如肺癌、神经母细胞瘤、l肾癌和前列腺癌等发生 有关。启动子区高甲基化，致使其抑癌作用不能发挥，导致肿瘤发生。这是广 大学者公认的观点，甲基化也成为近期研究的热点。鉴于目前国内外尚未见到 肾母细胞瘤RassFlA基因启动子区甲基化报道，我们采用定点检测基因甲基化 方法，检测9例肾母细胞瘤，结果如下。 方 法 收集2001年我院手术切除l肾母细胞瘤及相应瘤旁残留。肾组织9例，一70 ℃冰箱中保存备用。用酚／氯仿法提取DNA。采取强碱变性、亚硫酸氢钠／对苯 DNA片段。引物序列如下： ML ML561：5-CCCCACAATCCCTACACCCAAAT一3’： MU 379、ML730 第一次用引物MU PCR扩增经亚硫酸氢钠处理的DNA，用 其扩增产物，加引物MU379和ML 561进行第二次扩增，两次扩增条件相同： 循环在72[2下延伸5min。扩增产物测序。 结 果 9例中7例未获测序结果，2例测序成功。1例肿瘤组织在1～16个 基化：其余10个位点未发生C—T转变，即此位点CpG岛中的c存在甲基化。 该例瘤旁残留肾组织16个CpG岛甲基化位点均发生了C—T转变，即16个 CpG岛中的C都不存在甲基化：另l例在第6,9，10，12 CpG岛甲基化位点发生 了c—T转变，这些位点无甲基化：其余12个位点存在甲基化：此例瘤旁残 留l肾组织未获测序结果。两例肿瘤组织存在甲基化位点比较，仅有8个CpG岛 位点相同，其余位点不相同。 讨 论 肾母细胞瘤是,J,JL常见的恶性、胚胎性肿瘤，一直是研究热点。以往的研究 发现，该肿瘤抑癌基因较多，主要与WTl缺失和异常有关，也和wT2(候选 基因)异常有关。甲基化引起基因印迹缺失或抑癌基因的失活与肿瘤发生关系 密切，如IGF2／H19的基因印迹缺失。抑癌基因启动子区高甲基化使基因失活 59 不能转录，与肾母细胞瘤发生关系密切。如P16基因，在肾母细胞瘤中，启动 F区存在甲基化，无蛋白生成，不能抑制肿瘤进展。 RassFlA基因是一个抑癌基因。Dammann R等在3p21．3区定位克隆了一 蛋臼质。推测其功能：1．参与细胞信号传导，激活Ras途径。2与DNA损伤修 复蛋白一xPA相互作用，参与DNA损伤修复。3．作为细胞生长负向调控子。4． 介导凋亡。 对RASSFlA启动予区甲基化检测，在肾癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、鼻 咽穗、神经母细胞瘤、嗜铬细胞瘤、胃癌、前列腺癌等肿瘤，RASsFlA启动 f区均存在高频率甲基化现象，而且在前列腺癌中甲基化程度越高，临床预后 越差。 来处理A549肺癌肿瘤和MDAM23l乳腺肿瘤细胞系，结果，肿瘤细胞明显受 克隆载体细胞，注入经A549细胞移植的无胸腺鼠肿瘤内，结果，肿瘤体积较 对照组明显小，说明RassFlA基因的表达，对抑制肿瘤发展有作用。 在l肾母细胞瘤中，RassFlA基因启动子区甲基化情况，目前国内外尚未见 报道。我们检测了9例肾母细胞瘤RAS