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一种新的转铁蛋白压电免疫传感器的研究 王桦吴朝阳王存嫦沈国励‘俞汝勤 L湖南大学化学计量学与化学传感器技术教育部重点实验室，化学化工学院，长沙 410082) 转铁蛋白是人体内～种重要的铁元索载体，不少疾病都与血清中转铁 蛋白的含量变化有关，如缺铁性贫血、急性肝炎、蛋白质性营养不良等。本 文报道的压电免疫传感器通过在石英晶体表面沉积一层等离子体聚合膜，再 自组装一层聚电解质，得到一个可吸附固定转铁蛋白抗体和易于晶振再生的 界面，用于测定人血清中转铁蛋白，该传感器基本上克服了以往压电免疫传 感方法的种种缺陷…．具有操作简单、灵敏度高、稳定性好、响应速度快和 能反复再生等优点，能较好地满足临床检验的要求。 1．实验部分 I．1仪器与试郝 电容耦合式等离子体沉积设备(电子部第48研究所)：CN3165型高分 辩记数器(石家庄无线电四厂)：9MHz，AT切型石英晶振(北京无线电器 材厂)。单扩散效价l：60的转铁蛋白抗血清(卫生部上海生物制品研究所)： 血浆蛋白成份参考血清(转铁蛋白2366．8±42．2og／mL，卫生部上海生物制 品研究所)；人血清样本(湖南医科大学附二医院)；聚苯磺酸钠(PSS， SIGMA)；牛血清白蛋白(BSA，中国医药公司北京采购供应站)；其它试 剂均为分析纯；所用水均为二次蒸馏水。 1．2正丁胺等离子体聚合膜的制各 按照文献【11，石英晶振完成等离子体聚台膜的制各后，其中一面用O型橡 胶圈和塑料片封闭，使成单面触液。 1．3检测方法 将沉积了等离子体聚合膜的晶振置于聚苯磺酸钠(PSS)溶液(10册】0．005 mol／L PSS)中浸泡30min，至聚电解质完成自组装，水洗，晾干 HCl，20mg 备用。取转铁蛋白抗体6“1，用pH值为4．5的PBS缓冲液稀释至30p1， min，取出水洗，晾干；按同 滴加于晶振表面，于37c’的恒温箱内温育40 T／mE的BSA封闭抗体蛋白上非特异性活性点 样操作，用20u1浓度为10 ml 7．O)的检测池中，注入 位，最后将晶振安装于盛有3．0 PBS缓冲液(pm 待测的转铁蛋白参考血清，记录反应的响应频率直至反应结束，响应频移值 与转铁蛋白的浓度成线性关系。 mol／L mol／LNaOH和0．5NaCl混 完成一次测定后，将石英晶振用O．01 0 mol／L rain，嚓干备用。 合溶液洗涤1rain，再用O．01HCl和水各洗涤10 2．结果与讨论 2．1正丁胺等离子体聚合膜的形成 有机物单体的等离子体聚合牵涉到单体的同类聚合和异类聚合两个过 程，其机理相当复杂，目前尚无定论。K．obayashi等p1认为烃类单体的等离 子体聚合具有以下一些过程和特性：1)单体分子通过和自由电子或其它离 子或亚稳态原子发生碰撞产生自由基，这些自由基重新缔合，不断形成大分 子；2)聚合物本身通过与处于等离子体状态的高能物质碰撞，或者通过吸 13l 收其释放的紫外线不断形成自由基点；3)舍C=C键和C-x,C键的不饱和单 体比饱和单体更易聚合；4)聚合物中C与H原子的比率低于单体中的比率。 本文在晶振上沉积了正丁胺等离子体聚合膜后，进行红外反射光谱检测，发 现红外图谱上存在C-N伸缩振动、N-H平面剪式振动与伸缩振动及伯胺平 面剪式振动豹吸收峰，证实晶振上正丁胺等离子体聚合膜的形成。 2．2抗体分子的包被固定 实验结果表明，适于抗体包被的最佳pH值范围为4．0。7．2。表明抗体 蛋白质上的氮基基团在此低pH值环境下质子化程度较高，它因静电吸附作 用包被的量也较多。晶振包被抗体的适宜时间为40min。抗体包被溶液的 最佳稀释比为l：5，超过此浓度后，晶振的响应频移值开始逐渐下