人血小板生成素在家蚕中表达地研究.pdfVIP

以捌激IL一6依赣细胞株增殖，对于依赖于T细胞的B细胞抗体分泌具有刺激作用；与IL一3协同作用促 进人及小鼠巨核细胞的形成与成熟，促进原始祖细胞的增殖．增加血小板的数量，促进红细胞生成，诱导肝脏 因此，表达的蛋白缺少异质性。 构建了插人hIL一11基因的重组杆状病毒，并在家蚕中获得高效表达。 将携带有hIL一11 I醇切，经Klenow酶朴平后，用 eDNA的质粒pGEMIL一11，用限制性内切酶Nde BamH I酶切得hIL一11eDNA片段，该片段与经Hinc11和BamH I和BamH eDNA片 组质粒pBsIL一11。该质粒经Xho I双酶切，得到加上了XhoI爵切位点的hIL一11 I和BgIⅡ两位点之间，转化大肠杆菌TGl感受态细胞， 段，定向插入到转移载体质粒pBacPAK8的Xho 经挑斑培养后，描提质粒进行酶切鉴定。BamH I和B西Ⅱ为同裂酶，二者切割DNA得到的匹配末端，经连 I切点来鉴定重组质粒。重 II下游相邻的EeoR 接后不能再被该两种冀切开。因此，选用pBacPAK8上Bgl 组质粒经XhoI和E00R 因内部分别有一个Sac I酶切重组质粒可得到约360bp的小片 I切点．两者之间相距360bp，因此，用Sac 紧接于多角体蛋白基因启动子之后。 将重组转移载体pBaclL一11与经Aoc 的作用下，共转染家蚕培养细胞，经4～5天细胞出现发病症状。取培养上清系列稀释后，进行空斑筛选。挑 取重组病毒斑接种于精有家蚕培养细胞的96孔板扩增病毒，进行第二轮空斑筛选，初步鉴定得到了重组病 毒。 ． 而正常细胞和野生型病毒感染细胞总DNA、总RNA均为杂交阴性。进一步证明所获得的重组病毒已插入 了IL一11基因片段。 将重组病毒感染培养细胞，于培养72小时后收集培养上清液和细胞，细胞用PBS悬浮，加^等体积 量约24kd的特异性条带，与天然hIL一11的分子量相符。将重组病毒穿刺接种于家蚕五龄幼虫，待出现发 根据分子量大小推测，该条带即为表达产物。目前正在进行Western鉴定和生物活性测定。 鉴于IL一11重要的生物功能和临床意义，国内外多家研究机构相继进行研究和表达。但由于IL一11 的有效作用剂量较高．建立一种IL—11的高效表达系统具有广阔的应用前景。杆状病毒表达系统是近年来 发展起来的新型真棱生物反应器表达系统，具有表达效率高，表达后加工较完善等特点，已受到越来越多的 重视。而家蚕杆状病毒表达系统，因家蚕容易大量饲养、蚕体大，比其它昆虫的杆状病毒表达系统具有更大 的优越性，采用该系统表达IL一11，可望建立一条高效表达生产IL一11的有效途径。 人血小板生成素在家蚕中表达的研究 王晚琳空勇丰张耀洲是祥甫 (浙江大学生物化学研究所，杭州 310029；中国科学虎上海生物化学研究所，上海200031) 血小板减少症是骨髓移植和肿瘤放化疗中存在的一个主要问题。骨髓移植和肿瘤放化疗后血小板常较 1045 其他造血细胞系恢复慢(移植后大约需20～60天)。治疗主要是输注浓缩的血小板。随之出现的问题包括 异常免疫反应和输血反应．而且由于血小板需贮存于室温，也可能引起病毒性或细菌性感染。G—CSF、GM 成一定程度的血小板增加，但这些因子不能特异性地作用于巨核细胞，并可能造成不良反应。最近有研究提 示，用外周血干细胞做骨髓移植时血小板恢复较快，但还是至少需要输注两周的血小板。因此，如能用刺激 血小板产生的细胞因子成功地治疗血小板减少症则可大大减少血小板的需要量及输血并发症的发生。促血