单细胞内测量pH的微光纤传感器的研究.pdfVIP

单细胞内测量pH的微光纤传感器研究 何晓晓王柯敏’李军谭蔚泓肖丹羊小海唐志文 湖南走学化学d-z-#R．长沙．410082 在单细胞水平上实时、在线、无损地获取细胞内外信息和监控细胞生命活动过程 中细胞内化学物质的动力学变化，能为生命活动机理的阐释及疾病的早期诊断与预 防提供可靠的理论依据。传统的离子选择微电极最早被应用于胞内化学物质的测定． 如K+、Na+、Ca2+、M矿、I-V等n 近十年来，光纤传感器在分析化学、生物学、生理学等其它一些领域得到了广泛 的应用，它有许多优于电化学传感器的特点，如抗电磁干扰能力强，不需要参比电 极等。但由于大多数光纤的直径m之间，其响应时间远远不及微电极， 这大大限制了它在微观领域中的应用，因此，如何将光纤向微型化发展，发挥其在 单细胞研究中的重要作用是研究工作者们一直想解决的问题。九十年代初以来谭蔚 泓等研究者开展了一系列关于亚微米光纤方面的工作，并实现了单细胞内化学物质 的测量【2】。在本文，我们将直径为350微米的光纤拉制成直径为1个微米左右，并在 光纤上固定pH敏感试剂，将其应用于鲫鱼卵受精前后pI-I变化的测量。 实验包括两个关键的部分，一是如何实现光纤的微型化，二是在微光纤上固定 敏尊试剂。本实验利用model：pC．10型毛细管拉制机将除去包层直径为350徽米的光 纤拉制为1个微米左右(如图示)，采用真空镀膜将光纤度上铝膜。在修饰敏感试剂前， 光纤经2％r-(甲基丙烯酰)．丙基．三甲氧基硅烷化试剂室温下硅烷化l小时。将光 纤插入由丙烯酰胺、N．N．二甲基双丙烯酰胺、丙烯酰胺荧光素溶液及催化莉构成的 聚合液中，分别采用了近场光聚合和热聚台的方法考察了敏感试剂的聚合效果，实 验表明近场光聚台优于热聚合。将肇怖好舶光纤固定予自崩的流通兆中。检蠢了光 纤对不同的pH缓冲溶液(pH4．9)的响应特性及响应时间。实验衰磅随着pH的升‘ 高，荧光强度也增强，同时响应时间为1．2秒．我们将修饰好的噩徽米光纤应用手■ 童卵受精前后细胞内p硅变化的测量，实验结累表明■鱼卵细胞在受精后pH值有碉 显的变化，在受糟前pl弼．5，受糖后pH-*L．0。此实验结果符合文献鹇报道．兜翘照 。联摹人：湖南大学化学化工学院．Tel：0731-8822701，Fax：0731-8821525 ‰i1：蛔m岫i1．hunu．edlI．cn n7 在受精后。细胞内离子流发生了变化。细胞内的c矿、Na+-d：短时间内都会升高，与 此同时伴随口浓度改变导致pH升高，这可能是Na*／I-i+反向运转的结果例。 以上实验结果表明了将光纾微型化，并修饰对pH敏感的荧光试剂能实现单细胞 内口H的在线、无损监铡。因此如果在修饰时选用不同的敏感物质，就可制各不同的 生物传感器，实现亚微米光纤传感器在单细胞水平上实时、在线、无损地获取细胞 内外信息和监控细胞生命活动过程中化学物质的动力学变化。 a未拉制的光纤．=350um b拉耐后的光纤．-1·2um 参考文献 1．Ammann，D．Ion．Selective 2．TanW Z SmitheLI．Science，1992，258：778 H，ShiX S，et 3．汪垫仁，薛绍白，柳惠图，主编细胞生物学北京师范大学出版社1990版P147 致谢：本课雁由田家杰出青年基金(批准号、教育都重大课题(批准号： 学基金(批准号：OOGKYl011)资助． 118