在热休克反应中大白鼠肝脏HSP70+表达免疫组织化学研究.pdfVIP

在热休克反应中大白鼠肝脏HSP70 表达的免疫组织化学研究。 李效阳 张顺利 卢爱玲段瑞峰胡轶红徐存拴“ (河南师范大学生物学系．新乡453002) 摘要用免疫组织化学方法研究丁大白鼠肝脏在46c热休克30分钟后的恢复期(2．5～72小时) 内HsP70的表达定位和动态变化，及不同温度(42、44和46 c)处理30分钟、恢复12小时后，HsP70 的表达。结果表明：(1)HsP70主要定位于肝细胞的细胞质中；(2)在肝小叶中，阳性细瞻多集中 于中央静脉周围；(3)46c处理30分钟、恢复8一12小时，HsP70表达量最多；(4)不同温度热休 克处理30分钟、恢复12小时表明，46c处理组诱导丈自鼠肝细胞表达HsP70最多。用体视学方法 对实验组的HsP70表达进行了定量组织学分析。 关键词大白鼠肝脏热休克蛋白70(HsP70) 免疫组织化学体视学 and 热休克蛋白70(Hsp70)家族是主要的应激蛋白(subjeck shy，1986)，其在大肠杆 菌、酵母、高等植物、果蝇和哺乳动物等中都可诱导产生，并且具有高度的保守性(victor， 其他不利因素的耐受力。此外，其在胚胎发育、基因调控及生物信号识别等方面也具有重要作 培养的细胞为实验材料，而用整体动物作实验材料的同类研究较少。我们在系统研究了c。大 自鼠神经胶质瘤细胞的HsP70诱导、表达、功能、影响因素及降解过程后(Xu“dz．， 1987)，又分别用活性电泳和磷酸酶组织化学方法，研究了热休克整体动物(大白鼠)的水解 酶表达和大白鼠热体克反应中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性变化(吉爱玲，1998)，作者用 免疫组织化学方法研究了热休克大自鼠后，其肝脏Hsp70的表达动态、肝细胞热敏感性及 HsP70的定位。现将结果报道如下。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1实验动物SD纯系大白鼠，由河南师范大学生物系实验动物房提供，雌雄不限．体 重200～2509。 1．1．2药品和试剂 ～180氨基酸区域特异结合)。sP试剂盒(中山公司进口分装。二级抗体为山羊抗鼠lgG—Ap)、 11) 、中法先进技术项日(项目编号：B96 一-通讯作若． 827 DAB(中山公司进口分装)，本实验所用其他化学试剂均为分析纯。 1．2标本制备 将大白鼠随机分组，每组5只，置于电热鼓风干燥箱内(csl01—2D型，工作室550mm× 450mm×550mm，重庆四达实验仪器厂制造)，于早上7点到11点按下述方式进行热休克处理： 后取材；(2)46℃热休克后不同恢复组：46℃处理动物30分钟、室温(25℃)分别恢复2．5、 4、8、12、24、48和72小时后取材，取材时，摘除眼球放血，脊椎脱臼处死，然后．取同一 叶肝脏同一部位，立刻放入10％福尔马林中固定24小时，常规石腊制片，6pm连续切片．间 隔30pm取一片，每只动物取4片做免疫组化染色。 1．3染色 用过氧化物酶标记的链霉卵白索(sP)法染色。染色过程中，用PBs替代一抗作阴性对 照片。用未热休克鼠组织切片作正常对照片。加一抗前用微波炉对所有实验切片进行10分钟抗 原修复。抗体工作浓度及条件如下：一抗(1：600稀释)4℃孵育过夜，二抗(1：200稀释)37℃ 恒温孵育l小时，sP(1 z200稀释)37℃恒温孵育1小时。DAB系统显色，用苏木精复染。 1．4体视学方法 按weibe】法(1966)进行。每其动物取4张切片在lo×目镜，40×物镜下分别计数阳性细 胞的落点数氏和测试视野落点数尸。，以公式矿。一己P，．／乞P。分别计算各组动物阳性肝细 胞的体密度，其中己P。和2jP一分别为每组动物阳性肝细胞总落点数和测试视野总落点数， 然后，以方差分析作统计检验。 2结果 2．1不同沮度对HsP70表达的