蚊虫对登革Ⅱ型病毒中肠感染屏障机理和蚊体内病毒分布规律的研究.pdfVIP

医学昆虫 蚊虫对登革Ⅱ型病毒中肠感染屏障机理 及蚊体内病毒分布规律的研究 谢超 赵彤言 董言德 陆宝麟 (军事医学科学院微生物流行病研兜所，北京100071) 登革热和登革出血热由黄病毒属的登革4个型病毒引起，广泛流行于全球热带和亚热带 地区。而且近年来在亚、非、南美的热带地区发病率呈上升趋势。因登革热，登革出血热流行 的扩大，感染A教增多，使得这一疾病已成为这些地区的严重公共问题。由于目前尚无实用 的预防疫苗和药物，它的预防依赖其媒介蚊虫防治，目前已证实埃及伊蚊(Aedesm删i)和 p咖m椰砷蚓缸c“m)作为登 白纹伊蚊(Ae．albopi．avz)是其主要媒介，而致倦库蚊(Culex 革热媒介的可能性，有不同看法，多数学者认为可能性不大。有学者曾推测致倦库蚊对登革 2virus，DEN一2)存在中肠感染屏障，但对中肠感染屏的内在机制未见研 Ⅱ型病毒(Dengue 究报道。另外，目前虽已证实白纹伊蚊能感染并传播DEN病毒，但对DEN病毒感染其中肠及 越过中肠之后在媒介体内各组织器官的感染特点和分布规律仍不十分清楚。 基于以上研究背景，本研究以有效媒介白纹伊蚊和可疑媒介致倦库蚊为研究对象，在经 口感染大剂量DEN一2的基础上，首先通过病毒分离、RT—PCR柱测、透谢电镜等多种方法， 弄清致倦库蚊对DEN一2中脑感染屏的特征，进一步确证致倦库蚊对DF-．N一2的媒介作用。并 对致倦库蚊和白纹伊蚊吸血后中肠内胰蛋白酶产生的规律、胰蛋白酶对DEN一2的体外作用， membrane，PM)的形成规律与病毒感染的关系进行一系列研究，阐明 以及围食膜(Peritrophie 蚊中肠胰蛋白酶及PN在DEN一2感染蚊虫中肠中的作用及中肠感染屏障的内在机制。另外， 对DEN一2癣染及在蚊虫中骑组织内复制的特点进行透射电镜观察、并利用免疫组化技术对 DEN一2在白纹伊蚊中肠、唾液腺等组织内的分布进行组织、细胞定位，以客观地得出DEN一 2在媒介蚊虫体内各组织的感染和分布规律，阐明DEN一2感染蚊虫各组织的机制。这一工作 可为进一步解释DEN病毒媒介易感性及媒介效能，探索新的DF防治策略等提供新的依据和 理论基础。 l致倦库蚊对经口惑染DEN一2的中肠感染屏障作用及传播DEN～2 的媒介效能 通过病毒分离、滴度测定、透射电镜及免疫组化等方法，从多方面证实在相同感染条件 下．DEN能迅速侵染自纹伊蚊中肠等组织并大量复制，却不能侵染致倦库蚊中肠组织。整个 观察期问(即使经过一定的外潜伏期)，致倦库蚊中肠上皮细胞内均未发现病毒。病毒分离试 9～10”9) 验也未能从致倦库蚊体内及中肠组织内分离到病毒。本实验是在大剂量病毒(10s 928 走向21世纪的中国昆虫学 感染的基础上进行的，病毒滴度远高于常见的脊推动物血症病毒，致倦库蚊中肠组织不能感 染病毒并非因病毒感染剂量低所致。由此推断，致倦库蚊对DEN一2存在中肠感染屏障。另 外，透射电镜及免疫组化观察均表明，经口感染大剂量DEN一2的前提下，DEN一2病毒被生 物传播需首先感染的唾液腺组织及其他主要组织均未能感染DEN～2。而自然界蚊虫自然感染 时的病毒浓度远低于实验中所使用浓度，更不可能引发感染。因此，致倦库蚊不能感染DEN 一2，也不可能传播DEN一2，进一步确证它不是DEN一2的有效媒介。 2致倦库蚊对DEN一2中肠感染屏障作用的内在影响机制 2．1蚊虫中局内晨蛋白酶的生物学特性爰在中新意染屏障中的作用 应用逆转录聚合酶链反应技术分别从吸血后24h致倦库蚊及白纹伊蚊中肠组织反转录扩 In,的蚊虫后期胰蛋白酶编码区cDNA序列。以此为模板制备特异性探针， 增出长216bp和720 对吸血后不同时间两蚊虫胰蛋白酶mRNA转录水平进行狭线杂交检测。吸血后4—24h，两蚊 虫胰蛋白酵mRNA表达水平相近，均呈上升趋势，18—24h达峰值。而吸血后6h和8h分别从 致倦库蚊和白纹伊蚊中肠内检测到胰蛋白酶活性，活性值相应为14．67U和9．78U。白吸血后