微生物转化法生产雌酚酮地研究.pdfVIP

微生物转化法生产雌酚酮的研究 戚薇 赵伟 王禄 杜连祥 (天津科技大学生物工程学院 天津市工业微生物重点试验室) 摘 要:从实脸宜保成蔺种中筛选到菌株DW5，该菌株能将底物19-R一雄苗-4一烯一3,17一二 酮转化为雌盼阴。对DW5菌株转化培养基和转化条件进行了研究。研究结果表明:当转化培养 基破源为荀萄籍，氮派为酵母青，转化初始pH为7.0，装液蚤25mL/250mL三角瓶时，DW5 转化率最高。当投入底物浓度为5g/L时，雌酚酮转化率达90%o 关铃词:很生物转化;雌盼酮;苗体 MicrobialTransformationforProducingEstrone QiWeiZhaoWeiWangLu DuLianxiang (TianjinKeyLabofIndustrialMicrobiology SchoolofBioengineering TianjinUniversityofScienceandTechnology) Abstract:StrainDW5w as isolatedfrom thelaboratorypreservationstrain.Thestudyon u re medium andtranslationconditionshow thatthemostfitcarbon strainDW5translationcult source isglucoseandthemostfitnitrogensourceisyeastextract,themostfitinitialpHfortrans- lationis7.0，themostfitliquidloadis25mL/250ml,triangularflask.whileplungintosubstrate whichstrengthis5g/1,thepercentconversionreachs90%. Keywords二microbialtransformation;estrone;steroid 雌酚酮 (estrone)是合成雌激素类和19一去甲基幽体化合物的关键中间体。由雌酚酮合 成的炔雌醇及其醚类是妇女口服避孕药的主要药物;合成的雌二醇、雌三醇及其衍生物是妇 女更年期激素补充疗法的主要药物。目前国际国内大多采用化学合成法生产雌酚酮。化学合 成法具有生产成本大、收率低和不利于环保等缺点。目前，一些研究者开始致力于采用生物转 化法生产雌酚酮的研究，所采用的技术路线有多种，但目前还未有大规模工业化生产的报道。 本研究从实验室保藏菌种中筛选到的一株细菌，编号为DW5，该菌能转化底物19-R一雄 菌-4-烯-3,17一二酮生成雌酚酮，其反应式如下: R为:-COHZH:和一COH和一H 664 1材料与方法 1.1 菌种 菌株DW5:从本实验室保藏的有关细菌菌株中筛选得到。 1.2 试剂与材料 11户经一雌街-4,9一二烯-3,17一二酮和雌酚酮标准品:由天津福兴达精细化工有限公司提 供;其他实验材料均为市售。 1.3 仪器 高效液相色谱仪:德国BIOTRONIK公司。 1.4 培养基 1.4.1斜面培养基 (g/l00mL):葡萄糖1，琼脂2,酵母膏1,pH7.2，自来水配制。 1.4.2 种子培养基 (g/l00mL) 葡萄糖 1，蛋白陈o.5，玉米浆 1,KH2PO40.25，自来 水配制。 1.4.3 发酵与转化培养基:同种子培养基。 1.5 培养方法及转化方法 1.5.1种子培养 从斜面接一环菌于装有25mL种子培养基的250mL三角瓶中，320C，摇床转速200r/ min，培养10^-14h至对数生长期。 1.5.2 转化方法 将种子液以5吓接种量接人装有25mL转化培养基的250mL三角瓶中，320C，摇床转速 200r/min，培养17-20h(至对数生长后期)。在无菌条件下按5g/L的投料量投人底物 (粉碎 后过60目筛，在紫外灯下照射20min),320C,200r/min，转化14h，以TLC法确定转化终点。 1.6 分析方法 1.6.1 TLC法:取1m