烟草中游离氨基酸的指纹图谱探究.pdfVIP

烟草中游离氨基酸的指纹图谱研究 白长敏钟‘科军’许燕娟’黄建国’赵欣捷，孔宏伟路‘鑫许‘国旺 ‘ 1.中科院大连化学物理研究所，大连，116023, 2.常德卷烟厂，湖南常德，410082 游离氨基酸是烟草中的一类重要化合物，不同种类的烟叶由于受土壤、气候、田间管理等 因素的影响，其氨基酸的含量具有一定差异 【1]。在烟叶的调制、发酵和醇化过程中产生一系 列对烟草吃味有重要影响的物质，有些物质便是由氨基酸产生的，如苯丙氨酸是烟草香味化 合物苯甲醇及苯乙醇等的重要前体物 幻〔。因此，烟草中游离氨基酸的测定，对改进卷烟配方、 稳定烟草制品的质量都具有实际意义。 经典的氨基酸分析方法是荀三酮法 3【,4,5]，近年来柱前衍生反相HPLC法进行氨基酸测 定的技术得到了很快的发展，与茹三酮法相比，后者具有快速灵敏不需专门仪器等优点。文 献报导较多的是OPA衍生化法 6【]，但OPA法不能衍生二级氨且生成的氨基酸衍生物不稳定， 必须采用在线衍生，对仪器条件要求较高。本文采用FDNB柱前衍生化法对烟草中游离氨基酸 进行分析，方法稳定、灵敏度高、分析时间短，二十五分钟内十八种氨基酸得到了良好的分 离。 关键词:烟草分析;氨基酸;指纹图谱 1.实验部分 1.1主要仪器及药品 液相色谱仪(PDA检测器):SHIMADZU-100P〔日本岛津公司):超声波清洗器:舒美KQ118. 2,4一二硝基氟苯 (DNFB)及相关氨基酸标样购自SIGMA及大连美罗公司。 1.2提取及衍生化条件 称取0.20克磨碎均匀的烟叶样品于一干燥洁净的10毫升容量瓶中，加入5毫升蛋氨酸 内标液，旋涡混匀后，再用内标液稀至刻度，超声萃取15分钟，冷却，.转移至10毫升离心 管，以3500r/min离心10分钟，取上清液0.5毫升于5毫升容量瓶中，加入0.6毫升196DNFB- 乙睛溶液及2毫升0.5M碳酸氢钠溶液，混匀，于600C恒温水浴中反应1小时。取出冷至室 温，用0.1M磷酸二氢钾溶液稀至刻度，混匀，过滤后取W0LL进行HPLC分析。 1.3色谱条件 A:乙睛/水 =1/1 (VN); B:HAC/NaAC缓冲溶液。色谱柱:HypersilODS 4.6mm(ID)x100mm 3um: 检测:UV360mm : 流速:0.8ml/min; 柱温:室温。 梯度:time(min):0 2 3 6 12 16 17 26 27 40 B%: 88 76 61 61 42 30 25 25 88 88 2.结果与讨论 2.1定性定量方法 采用标样与样品的保留值及相对保留值比较、标样添加、光谱图对照等方法进行定性;内 标法定量。 2.2 部分相关谱图 的4，，- 俘办 卜-. -一卜. 一 :— ;补 Lambdamask:380 249 臼 明7 明0 ; 164 tambda梢欲 :-傲拍弓心旧口一25舜吃目7-加粉-一 Lambdamiii ;Lambda泊in :即，; 30匕 3002卿00一 相 04 一t - ‘ 义立_.__ 0 汗 J 刁 习 咖 250 300 350 叨0 书0 nm 图1，标样脯氨酸衍生物光谱图 图2，烟叶样品中脯氨酸衍生物光谱图 658 厂 一户7 曰 川