冬虫夏草菌突变基因型的存在与差异表达的动态变化.pdfVIP

第32卷增刊 中国草地学报 2010年7月 V01．32 Chinese ofGrassland Jul．20t0 Supp． Journal 文章编号：1673—5021(2010)增一0076—03 冬虫夏草菌突变基因型的存在及差异表达的动态变化 朱佳石1’2”，高 凌2，李晓红4，姚艺桑2，周妍娇2，赵建晴4，吴子嫩2，陆继红2 (1．PharmanexResearchInstitute。ProvoUT84601 USA；2．美国华茂公司北京临床药理研究中心。北京100088； 3．石河子大学药学院。新疆 石河子 832000；4．博奥生物有限公司，北京102206) sinensis)因其独特的形态化。 冬虫夏草(Cordyceps 而得名，又因其阴阳双补的临床功效而扬名海内外。 1 方法和结果 数百年来，这味名贵中药用于保健、治疗和病后康 复，近年来现代药理学和临床药理学研究验证了冬 1．1 虫夏草及其替代产品的疗效儿“]。除了大量文献报 一质谱基因分型检验 道的冬虫夏草菌(Ophiocordycepssinensis)GC一偏 倚基因型之外，学界对天然冬虫夏草中存在多种基 SNP位点用以设计延伸引物(不区分两个AT偏倚 因型冬虫夏草菌存有争议。Stensrud等用Bayesian 法分析了2006年底以前GenBank／EMBL中注册的型)；另外还设计了3对延伸引物，用于区分两个AT transcribed 冬虫夏草ITS(Internalspacer)片段的偏倚基因型。从未成熟冬虫夏革子座提取的DNA 70多个rDNA序列，聚类了至少5组基因型，提出 冬虫夏草含多种“Cryptic(phylogenetic)species”和 assistedlaser offlight) 菌种复合体的学说一]。其中，与中国被毛孢(Hirsu— tella sinensis)有关的冬虫夏草序列聚类为三组：中质谱分析进行单核苷酸多态性(SNP)基因分型检 测rl…。在区分或不区分两个AT偏倚基因型的试 国被毛孢属A组GC偏倚型序列(AT=35．4％；以 验中，发现GC偏倚型和两个AT偏倚基因型同时 gb#AB067721为代表)；而AT偏倚型(相对于GC 偏倚型序列)的B组(AT=46％)和C组(AT一存在于未成熟冬虫夏草子座中。这3个已知序列基 因型之间出现嘌呤与嘌呤，或嘧啶与嘧啶之间的转 48．7％)分别以gb#AB067744和AB067740为代 表。3个基因型组的ITS片段相似性低，存在大量换点突变。MassARRAYSNP基因分型法还检测 散在转换点突变，特别是在遗传进化中表现保守的 到另外2个未知序列的基因型，这2个未知序列基 5．8S 因型在SNP点位，出现嘌呤与嘧啶之间的颠换点突 rDNA段序列相似性很低‘引。郝剑谨等应用 PCR扩增ITS片段直接测序，从冬虫夏草产地21 个居群中未检出AT偏倚型序列r6]。杨金玲等和 基因型的生物量甚至高于GC偏倚基因型。当按照 Xiao等应用分子克隆测序法证实了GC和AT偏倚 型序列在天然冬虫夏草中共存[7~8]。然而在单株冬 图谱中可见到颠换点突变的未知序列基因型的生物 虫夏草中Xiao等发现AT偏倚型序列的检出率低， 推测AT偏倚型“很町能属于其他真菌”[8]。文献也 报道天然冬虫夏草的成熟伴有化学