猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxIC基因缺失突变株构建.pdfVIP

第口发猪病学术研讨台会谈论文董 !{黜 。黼。耥：洲黝；；?踹嚣馏嚣躲麓髹紧：!器糠。。。。。。： 7H7的转印条带：M低分子量§白标准Ma^c‘ 3讨论 迄今，虽然已有0157 H7尊克隆抗体的撤道，世远小能满足多种研究的需噩．制备更多 57：H7 的0l57·H7单克隆抗体．f仪址建立0157H7的快建检测方法的需要，们且对进步研究0l 的抗蟓结构和致璃机理以及指导临床治疗也是r分必要的。 本实验采崩r113醛灭衍趟声破碎的伞蔺体抗朦免疫BALBk鼠，建立r七株能稳定分泌抗 Ec甜Ol 体．其它凹林mAbs与禁衅苴他血消型的大肠杆曲及链球菌ss2．1仃空叉反应，这实骏结果不仪表 明大肠杆蒲的抗艇成分1分复杂，不同血清颦其至列种血清型小捌菌株之问仃在特大量的共同抗 原表位．1Ⅱ且提示采用摹田L科技术制蔷单一成分重组批胀免艘劫物，足提高拱得口的引对性巾克 隆抗体{氍牢的垂婴途径。 OI 水宴验为制备Emn57：H7不fq抗原表他的特芹性单兜降札件提供，柯价值的资科．具打·R 拦的理论指导与吱验技术借牿意义。 参考文献(略) 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌A”Ic基因缺失突变株的构建 62如14l 猪传染性胸膜肺炎(PcP)足由胸膜肺是欣线朴曲(APP)引起的高度接触性呼吸通传染病，该删耐 我国的养猪业造』垃巨大的经济损火。目前疫茼免疫接种足预防年¨控制茨病的主要措埯2，而宅产 L使用的会苗灭活疫苗帚J亚单位疫苗并不能降低jE发病率．对抖源血清型菌的感染也币能提供完全 的空叉保护。APP的自然感垫能够诱导动物机体产生抗异源血浦型的傈护，冈此弱毒活疫苗研究址 APP疫苗研究的重要研究方向。本试验进行了猜传染性胸膜肺炎破线杆茼A矾Ic基闪缺失喊毒株的 构建研究。 l重组转移载体口BosKAIc的构建： 1．1 APP正负啼选表达盒构建 接omJaP、sacH、Kan7的排硎顺仔酶切连接到城体pBIuesc^p“IsK+的肼口屿铆删i切位点之问．构 细菌病一猪其他细菌病 过卡那霉素抗件实验，表明含自．pBS—OSK质粒的大肠杆菌具仃Kan抗性；蔗糖敏感性实验表明含有 pBS．OSK载体的人肠杆菌对蔗糖敏感。本试验表明成功构建了以苦那霉素抗性基因(Kan。)和枯草芽 胞杆菌的果聚蔗糖酶基冈(sacB)的正负舣向筛选系统。 1．2重组转移载体pBoSKAIC的构建 以APP5 转移载体的左、右同源臂，将扩增到的片段TA克隆至pMDl9一T，经PCR、酶切和测序糁定正确后， 的ApxIC基因的APP5K17株最组转移载体pBOSK△IC。 2 APP ApxIC基因缺失突变株的构建 3h后将细菌均匀涂布在含卡那霉素TSA甲板培养18h，从平板卜筛选具有卡那霰素抗性的菌落，再 将}￡有K邱霉素抗性菌落接种到lO％蔗糖的TSA平板峪定射蔗糖的敏感性，在证实酶落Kan抗性、 蔗糖敏感的菌做PcR鉴定。随机挑选一株鉴定正确的菌落接种于无l那露素的TSB培养摹培养过 夜，以促进第二次同源重组，把培养物稀释后涂布含10％蔗糖小含卡那霉素的TSA琼脂平板，将筛 鉴定，最终筛选到一株豁定止确的AxpIC摹因缺失突变株(K17△IC)。遗传稳定性试验证实突变株 在体外连续传10代基冈能够稳定遗传。溶血活性试验证实突变株体外培养不表现溶血活性：细胞毒 性试验证实突变株的细胞毒减弱；缺失株的LD5t)为1．12×109，亲本株LD50为6．09×107。这些表明构 建的基凶缺失减毒株毒力明显降低，为进一步以此突变株作为摹凶上程弱毒活疫苗株的研究奠定了 一·定的基础。 表达T+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的 构建及其生物学特性 赵战勤王臣 丁轲张春杰李银聚刘一尘 吴庭才程相朝 (河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003) 摘要粘膜免疫与多价疫苗是未来免疫预防传染病的重要方向，以细菌为载体的重组活疫苗是其最有