血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦抗大鼠肝纤维化疗效与机理的研究.pdfVIP

血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦抗大鼠 肝纤维化疗效及机理的研究 申凤俊 朱跃科 贾继东 毛佳 马红 王宝恩 首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心(100050) 摘要 目的研究血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦对二甲基亚硝胺(DMN)大鼠肝纤维化模型的 mRNA水平明显高于正常对照组， 纤维化的程度，降低肝脏AngII的水平。同时模型组CoI。一I及TIMPl 缬沙坦预防性治疗组CoI。一I及TIMPl 因子的作用下，局部RAS激活，缬沙坦具有良好的抗肝纤维化作用，可能为临床慢性肝病肝纤维化和早期 肝硬化提供一新的治疗方法。 关键词缬沙坦 肝纤维化I型胶原基质金属蛋白酶组织抑制因子 血管紧张素Ⅱ DMN模型是一较有价值的模型，可用于评价中西药对伴有活动性病变的慢性肝病所致肝纤维化的防 治作用oJ。近年来随着对肝纤维化机理的研究深入，已经认识到肝星状细胞(HSC)是肝纤维化时细胞外基质 的主要细胞来源。进一步对受体生物学功能及局部肾素一血管紧张素系统(RAS)的研究发现，心脏、肾脏局 部RAS的激活，是导致组织损伤后心、肾问质纤维化发生的主要因素，抑制RAS活性可显著抑制心、肾间质 纤维化的发生，然而局部RAS在肝纤维化的发病机制中的作用尚未确定，以及RAS抑制剂对肝纤维化的治 疗作用缺乏系统的研究。 奉实验的目的观察血管紧张素I 模型的疗效，从而探索缬沙坦抗肝纤维化的可能机制和对肝脏RAS的影响。期望能为临床肝纤维化和肝硬 化寻找新的治疗方法提供实验依据。 材料与方法 Neo Ab一1 究所。免疫组化试剂盒：中山试剂公司产品。小鼠Actin，Smooth 5 Primer、4×dNTP、TaqDNA聚合酶、PCR EI．MER Doe CETUS公司DNA扩增仪，Bio—Rad公司核酸电泳仪及Gel2000型凝胶成像系统。 (二)主要药物缬沙坦(商品名代文)原粉由诺华制药有限公司惠赠 (三)实验方法 1二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化大鼠模型的制备及动物分组 将34只大鼠随机分为3组，正常对照组10只；模型组12只；缬沙坦预防性治疗组12只。除对照组外， 组给予相同剂量的生理盐水腹腔注射。预防治疗组从实验第1天开始灌胃，直至实验结束。模型组、正常对 照组和治疗组在8周分别杀死大鼠10只，取血和肝组织备用。 ·206· 镜下观察。 的标本储存于一20℃，30天内成批测定。 (R，I—PCR)方法检测。 1 4 RNA提取应用TRIzol(一步法)总RNA提取试剂盒提取肝组织总RNA。 4 2 5Primer、 4 3扩增半定量PCR参照分子克隆实验指南[31进行。 94C变性30 CoI．一I及TIMPlmRNAPCR反应体系为50pl。PCR反应参数为：94C预变性2分钟i 秒；55 袭l CoL—I，TIMPt盈GAPDH引精序列 One软件进行半定量分析，计算基因相对表达值。用目的基因与GAPDH的比值表示 体，37C，50分钟，DAB显色，蒸馏水清洗、苏木素复染、脱水、透明、封片。 (四)统计学处理 齐性检验，符合上述条件者行单因素方差分析，不符合上述条件者行秩和检验。 实验结果 模型组体重及肝湿重／体重明显降低，差