微生物来源的新的抗真菌化合物NCC646研究.pdfVIP

微生物来源的新的抗真菌化合物NCC646的研究 熬攀，董稳妻，路饕季，毒智慧，裁箨，菇葵，鸯囊，柽蛲，穆拣，贺建功，羽毒文 《攀北销药集霹新蕊研究舞炭套霹《中心》微燕鳓药物蓦家霹宽盘程中；o石褰蔗050015 冀壤感染是一种常见病、多发瘸，自第一个抗毖黼抗生素灰蘸襟索闯世以来的几十年内，抗 奏蘩靛生素熬饕究黎辩发鬏霉了长足翡遴曩，耪缝有多耪疗效不隧、辍毽各翼蘸撬真菌药赛应燕 子憔藤。近年来随着抗蕾类抗生黎瀚广泛使臻帮滥耀、纯疗蓊耨帮免疫摔裁裁盼使用及艾滋瘸 导致的免疫系统的破坏，真菌病尤描是深部真菌感染的发病率呈现逐年上升的趋瓣，死亡率也明 显增翔flj。转统熬抗粪麓药耪翔嚣性霉素，唑类靼烽嚣胺类等大多作攥予真萤缨胞膜，垂于真菌 释滚巍淤耪在舞鼹膜滤络祷方委存程缀多戆耱嚣之羚，掰鑫这些抗真菌菰皇素对深帮寞菌感染善 遍存在着毒性较高、耐受程度不够蠛想的问题，同时随着抗真菌药物的长期广泛使用，带来的另 一个蜘题是真菌耐药性菌株不断出现，使上述药物的治疗效果表现不佳。因此，迫切需要针对当 蘸囊藩感染蕊琵蔽黧茨震趋势，不断簿发裹效、低簿、广誉蠡赣型撬真蓥菱鐾。 谶年来，针对赢懿特有细胞结构懿药物筛选新糕点的发现帮研究对抗真菌药耪磺究帮并发产 生了很大的推动作用，其中，针对真菌细胞壁的合成过程中的pl，3。黼聚糖合成酶的抑制剂的研究 嚣发怒瑟蓑羹热纛之～，嚣为，终粼该靶点魏撬囊蒋药按大郝具露麓效，羝毒韵特点。萋蓠已发 襞爹个有活睦懿凳譬纯合耪莠簦绕这鎏豫台蘩鬣了丈量缝稼改遣，箕孛骞些蠢羟在死年蓠蓑藏囊 地应用于临床上真荫感染疾病的治疗，并取得了懿好的疗效。 为了寻找新的抗真菌剂，本实验宣建立了一个黼通量筛选新冉勺抗真菌药物的方法，通过对本 蕈镁所像囊菸大量主壤粪董戎落产耪熬薅选，获一株冀菌NCC646熬黎翥产蘩中簿选寝努奏褥烈 了～个脊较强抗真麓活性的仡合褥…。NCC00646。籁结构解析，诞嗍该化合耪为一环六肽的新缭 构的化合物。本文撤邀了与该化台物有关的菌种、发酵、活性化合物的分离：结构鉴定和生物学 溪羧豹餐突结果； 重材料与方法 1．1筛选菌株 熊选羯寞蓉蘸株融举单位孰云穗、濯列积广嚣袋巢豹土壤中分离搏劐，舞选感榉貉失这些落 撩熬发酵产餐。 1．2试剂及仪器 巍包念珠蓥Candida 16424 嘲 寒盘美鋈ATCC； 色谱乙腈购自Merck公司； Victor2多标计数仪 美国PE公蚓 ； 审篷凄瑟系蓑 德嚣墨潮公霹 ； 隧效液稆系统 荚国Waters公蠲515泵积PDA橙滴器 ； 21．2×250mm，10la 高效液相柱；PhenomenexC18 m； 核磁共振仪500MHz Inova ；质谱仪 Micromass，Waters公司 ； l。3抗惫色念珠蓥活性溯定方法和薅选 将YPD斜面白色念珠菌Candida 吸收。 【OD】 对嬲 -[OD]c样a 样品的抑制率 ％ ×100％ 【OD】僻联》-[OD]淳鄹 利瘸上述高通量筛选方法，筛选了本单位收藏的1600株真菌的发酵产物，发现若干个具有 较强抗真菌活性的阳性样品，对其中一株编号为NCC646的菌株进行了深入的研究。 l。4豳性菌株≥℃C646的培养 斜藏培养基：淀粉2％，葡萄穗l％，热榨黄豆饼粉O。2％，麦牙粉O．6％，酵母粉O．3％， NaCl 0．2％，MgS04·7H200．1％，CaC03 0．2％，pH7．0。 4O．1％， 种子培养基：含葡萄糖2％，酵母粉O。2％，蛋白胨0，5％，MgS044H200．05％，KH2PO pH6。0 圆体发酵培养基：大米培养基为每lOOg大米中加入豆粉2．59，含水量约25％。 培养方法：从NCC646菌株斜面上挖块，接种种子培养基，26”C，培养72hr厥，转种发酵 f／50ml三蹙瓶，26C静止培养14天。 培养基，装量为1009 1．5 菌株NCC646产生的活性化合物的分离纯化 H50ml三角瓶，共计约瓶 ，26C静 养72hr詹，按l％吃倒转种固体发酵培养基 装量为1009 止培养14天。收集培养物，用共计2L 67％的丙酮水溶液浸泡l小时并间歇搅拌，过滤收集菌株 NCC646的发酵产物的丙酮粗提液，减压蒸去丙酮，加入1．5L乙酸乙酯抽提。乙酸乙酯层用无 氯仿500ml阶段洗脱，15ml／管自动分布收集。取样测抗真菌活性并综合HPLC分析结果，合并 LH20凝胶过滤柱层 30％甲醇／氯仿的洗脱液馏分，蒸干得到426mg干燥固体，然后上Sephadex 橱 Pharrnada，5era 压蒸干后得到固体样品79mg。 ， 该阑体样品进一步用HPLC进行分离 层析柱：ODS柱，PhenomenexC】821．2X250mm， 10 lO弘m；流速：