随机扩增多态性DNA技术在金黄色葡萄球菌临床分型中应用.pdfVIP

【12】武凯歌，文小敏，洪冰，等．王氏连朴 的 影 响 [J】． 江 苏 中 医 饮对脾胃湿热证大鼠血清IL-2、IL-6等 药，2010(5)：71-72． 随机扩增多态性DNA技术在金黄色葡萄球菌 临床分型中的应用 薛建新1孙杭2张王山1易永祥1叶正青1张继宗1 (i．东南大学附属南京市第二医院，南京中国；2．东南大学基础医学院，南京中国) 【摘要】金黄色葡萄球菌是医院和社区获得性感染的主要病原体。在80年代耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌(MRSA)以惊人的频率出现，因此在过去十几年里MRSA的传播分析是研究 焦点，已证实MRSA菌株间高度遗传学相关性是应用常规细菌学方法进行流行病学分析的障碍。 随机扩增多态性DNA技术(RAPD)，正广泛应用于越来越多的微生物研究中，其以快速、简 易、分辨力高等优点成为直接分析许多病原菌基因组、明确菌属间克隆来源的重要方法。本文 对应用了RAPD的金黄色葡萄球菌分型研究的最新研究进展加以综述。 【关键词】随机扩增多态性DNA技术，耐甲氧苯西林金黄色葡萄球菌，基因 1 RAPD技术 普遍适应性，适用于自动化操作分析。 2 随机扩增多态性DNA技术(Random临床应用 、 DNA，RAPD)，是由RAPD已在医院感染的病原菌分子流行 AmplifiedPolymorphic 美国科学家Wiliams和Welsh于1990年分别病学调查、病原菌的基因多态性分析中发挥了 研究提出的，又称任意引物PCR。它的应用 巨大的作用111： 是基于这样的一个推理：对于同一模板DNA， 2．1应用RAPD在金黄色葡萄球茵不同菌株间 用同-71物扩增既可能得到相同的带谱(模板遗传基础相关性上的研究 基因组间可能具有同源性)，也可能得到不同 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)因 的带谱。仅在某一特定模板中出现的条带就可 其多重耐药性，常易导致临床重症难治性感 作为该模板的分子标记。事实上，不同基因组 染。社区获得性与医院内感染MRSA的耐药性 不一致，其原因可能因抗生素选择压力在社区 DNA总是一定差异的，所以用RAPD就可以 进行分子标记研究。理论上讲，在一定的扩增 中比在医院内低，多重耐药菌生存条件相对 条件下，扩增的条带数取决于基因组的复杂 差，导致社区获得性MRSA表现为较弱的或无 性。对特定的引物，复杂性越高的基因组所产 多重耐药性两者的遗传基础有本质的差别也 生的扩增条带数也越多。与传统PCR相比， 可能导致耐药性的差异。有学者收集临床标 RAPD使用了随机引物，不需预先了解目的基本，将其分为社区获得性MRSA与医院获得性 因和相应的序列，而且实验周期短，引物具有 MRSA两组，并提取两组MRSA菌株的DNA， 440 酰胺类抗生素敏感：这一结果提示：金黄色葡 PCR检测MRSA的标志性基因mecA，选择 萄球菌的临床菌株，可以通过RAPD核酸分型 mecA(+)DNA利用RAPD技术扩增出各菌株的 RAPD．DNA指纹图谱，随机扩增多态性DNA技术做进一步的型别鉴定，可望在基因水平上 行聚类分析，比较两组是否存在分型差异，从 对临床细菌的耐药性等情况进行测报i6]。 而推断两者在遗传基础上是否存在差异【2I。研 Jemili．Ben 究结果示两者分组并未见显著差异，未提示两 例完全隔离的金黄色葡萄球菌携带者中分析 者遗传基础不同，可能原因为：①社区获得 出了7种基因型，有力地证明了RAPD可以作 性MRSA与医院获得性MRSA在遗传基础无