应用腺病毒载体系统将HBV／C全基因组转导入HepG2细胞的方法学研究.pdfVIP

· l764· 南方医科大学学报 J『SouthMedUniv) 2008；28(1o1 应用腺病毒载体系统将HBV／C全基因组转导入HepG2细胞的方法学研究 周 彬 ，梁敏锋 ，李伟东 ，王 程 ，王战会 ，侯金林 l南方医科大学南方医院感染内科 ，广东 广9’I,I510515； 韶关市铁路医院检验科 ，广东 韶关 512023) 摘要 ：目的 运用腺病毒系统将 HBV／C全基因组高效地导入肝癌细胞系 ．为研究HBV 的复制及蛋 白表达情况构建技 术平 台。方法 构建HBWC基 因型毒株的 1．3拷贝全基因序列 ，运用腺病毒系统 (AdEasy)，首先将 1．3拷 贝HBV全基 因序列插入到穿梭载体 pAdTrack，经测序证实插入序列的正确性后用 eI酶切线性化重组穿梭质粒 ，转化 Adeasier-1感受态细胞 ，在细菌细胞 内发生 同源重组，所得重组腺病毒质粒pAdEasy—HBV／C用PacI酶切线性化 ．用脂 质体法转染293细胞来包装重组病毒。用适量感染复数的重组腺病毒感染 HepG2细胞 ，并对感染细胞上清 中的HBV DNA、HBeAg和 HBsAg分别进行 了定量检测 。结果 成功运用腺病毒系统将 1I3拷贝HBV全基 因组高效率地导入 HepG2细胞 ，导入的HBV能够运用 自身的复制调控元件进行病毒 的复制和蛋 白表达。结论 运用AdEasy系统能够简 便、快速 、高效地将 HBV全基因组导人肝癌细胞系，为抗病毒药物的筛选及评价提供 了有效的技术平台。 关键词 ：肝炎病毒 ，乙型 ；腺病毒 ；AdEasy系统 中图分类号：R373．21 文献标识码 ：A 文章编号：1673-4254(2008)10—1764．04 Adenovirus—mediatedtransductionofHBV／C genomeintoHepG2cellline ZHOUBin，LIANGMin-feng，LIWei—dong，WANG Cheng，WANGZhan-hui，HOU Jin—lin DepartmentofInfectiousDiseases， NanfangHospital， SouthernMedicalUniversity， Guangzhou510515， China； Departmentof LaboratryMedicine，RailwayHospitalofShaoguan，Shaoguan512023，China Abstract： ObjectiveToestablishamethodforemcienttransferof1-3．foldHBV／CgenomeintoHepG2celllineusing adenoviralvectorsystem forstudyingthereplicationandantigenexpressionofHBV． M ethodsThe13-copyoverlength genomeofHBV genotypeC wasconstructedand cloned intotheshuttlevectorpAdTrack． Afterconfirmationofthe constructedHBV genomebysequencing． theresultantplasmidlinearizedbydigestionwiht 1wastransfomr ed into competentE．col Adeasier一1cells． TherecombinantsofoAdEasy．HBV ／C werelinearizedby digestion withPac Iand transfectedintothepackagingcells (293cells)vialiposome．HepG2cellsweretheninfectedwithaproperquantityofthe recombinantadenoviruses．TheHBV DNA levelandHBeAgandHBsAgtitersweredetectedinthecellmedium．ResultsThe 1_3一foldoverlengthHBV／C genomewasefficientlytransferedintoHeDG2cellsviatheadenovi