蛋白浓度对干扰素γ原液纯度测定(HPLC法)的影响.pdfVIP

蛋白浓度对干扰素^r原液纯度测定(HPLC法)的影响 杨文震 陈哲文金于兰(上海生物制品研究所质保部200052) 【摘要】目的确定重组人干扰素7原液纯度测定(HPI￡法)时蛋白浓度影响的范围及原因，提高检测准确 性。方法对HPIt纯度测定结果≥95．o％的干扰素原液进行梯度稀释后再测定其纯度。结果因I-IFI．C系统在 测定低蛋白浓度样品时以降低信噪比为代价，提高样品检出率。使原先高纯度样品的结果降低．甚至95．o％。结 论今后对低浓度的干扰紊样品应考虑浓缩后再测定HPIJc纯度。 【关■词】干扰紊丫色谱法高效液相 ． 组件。996全波长二极管阵列检测器，色谱工作软件 引 言 M3 2。 G3000SW型凝胶色谱柱。 重组人干扰素7(干扰素7)是以基因工程技术 色谱柱：TSK 由大肠杆菌中克隆表达所生产的…。根据《中国生 流动相：同3。 物制品规程)2000版的要求，应对其原液进行一系 5．试验方法 列的质量检测。原液检测项目包括以高效液相色谱 对原液及稀释后的样品测定其纯度。 测定色谱条件：室温(10～24。C)，流动相流速 法(HPLC)测定干扰素7蛋白的纯度，HPLC以样品 分子量大小检测其纯度。规程要求结果在95．O％ 以上‘…。 在lO分钟左右。 作者在质检工作中发现干扰素7原液的蛋白浓 测定结果 度对其HPLC纯度测定有影响，低浓度的样品常出 现HPLC纯度测定结果95．0％。为确定这种影测定结果见表1，2，3。 响，本人进行了如下实验。 测定图谱以样品2为例，样品2各浓度测定的 代表性谱图见图1，2，3： 材料与方法 1．干扰素Y原液稀释液 3批经HPLC检测纯度95．0％的干扰素7原 液。蛋白浓度分别为780，649，562蚓ml，相应HPIE 检测纯度为99．0％，100．0％，99．5％。 圈1叠白浓度为6401tg／ml时的图谱 将蛋白浓度为780／tg／ml的样品1，稀释到585， 390，195pg／mlo 可见系统基线基本水平，单一峰，峰高为 将蛋白浓度为649pg／ml的样品2，稀释到552， 433，390，357，325，163ue,／n．Il。 为是噪音，未确定为蜂。 将蛋白浓度为562t,e,／rIll的样品3，稀释到421， 393，337，281，141pg／ml。 2．重组人干扰素alb原液 取蛋白浓度为685t吲ml，1-IPI上检测纯度为 99．6％的重组人干扰素nlb原液，作为测定时的参 照品。 圈2叠白浓度为船5lI∥d时的圈谱 3．0．3mol／L NaCl．磷酸盐缓冲液Iprrt．5) 干扰素7原液的生产，存放，稀释用。 此图可见基线尚平，主峰高度较上图有所降低， 4．I叫系统 WATERS HPLC系统，包括2690泵、自动进样器明显大于基线波动两倍，为系统所确认。 ·27l·