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全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 B18离子液体对胰酶酶解效率的影响 韩彬1，2张丽华2宰汪海林1·张玉奎2 l中国科学院生态环境研究中心，环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京，100085； 2中国科学院大连化学物理研究所，中国科学院分离分析化学重点实验室，大连，116023 离子液体被公认为“绿色环保溶剂”，广泛地应用在毛细管电泳【l】、液相色谱f2】等分离分析 化学领域，尤其在样品的提取分离等预处理方面【3】。生物大分子的预处理过程是极其重要和相 对复杂的步骤，影响到后续所有的分析检测程序。随着离子液体在生物大分子分离分析中研 究的不断展开，对蛋白质在存在离子液体的溶液中的稳定性、酶解的充分性以及质谱检测等 步骤的兼容性提出了质疑——是否有较大影响。 本论文选用热变性的方法变性标准蛋白质牛血清白蛋白(BSA)，而后加入离子液体和胰 酶，考察离子液体对胰酶酶解的影响。 实验部分 BSA 90。C热变性，冷却后进行烷基化反应；分别加入1．丁基．3．甲基咪唑四氟硼酸盐 (1-butyl一3-methylimidazolium 盐(1-butyl-3-methylimidazolium 白质溶液稀释到lmg／mL；接着加入胰酶溶液酶解；所得产物使用C18捕集柱除盐， MALDI．TOF／TOF MS检测。 结果与讨论 由评价得分、序列覆盖率和肽段匹配数的检测结果可以看出(图1)，随着BF4型离子液 体浓度由0．27M增大到1．62 M，胰酶酶解效率得到了明显提升，BSA的序列覆盖率可提高 63．81％。 在浓度较低的T1、配组，【bIIlim]TFMS离子液体对胰酶酶解效率有一定的促进作用；随 着离子液体浓度的增大，胰酶酶解效率有所增加，在达到0．9 M(T4)时达到最大值；当浓度 增大到lM以上时，对胰酶的抑制作用强烈，使酶解效率下降，在达到135M(T6)时急剧 下降。当离子液体浓度在1 M M以下时，BSA的序列覆盖率可提高30％左右；当浓度超过l 全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 时，序列覆盖率则下降37％。 低浓度和高浓度的BF。。型离子液体均对胰酶催化有一定的促进作用；TFMS‘型离子液体在 浓度1M以下时对胰酶催化有一定促进效果，但在较高浓度时呈现抑制作用。结果说明，BF4’ 型比TFMS‘型离子液体更有益于胰酶酶解效率的发挥，可能原因是BF4型离子液体在一定程 度上能更好地保证胰酶的催化活力，同时可较长时间地保持胰酶活性分子的数目，并抑制胰 酶自身的降解。 M_ALDI．TOF．TOF 图1离子液体对胰酶酶解效率的影响(a) MS检测评价得分(b)MALDI．TOF-TOF MS检测序列覆盖率(c)MALDI-TOF-TOFMS检测肽段匹配数。MALDI．TOF．TOF MS条件：固体激光Smart Beam技术(355珊)；加速电压：21．85 kV，正离子反射模式，500次激光信号。 结论 BF4。型离子液体对胰酶酶解效率有明显的促进作用，且随着离子液体浓度的增大而增强： 而对于TFMS。型离子液体，在浓度低于1 M有一定的促进效果，当浓度达到1M以上时，对 胰酶酶解效率的抑制明显增强；在相同的浓度下，TFMS。型比BF4’型离子液体对胰酶酶解效率 有明显的抑制作用。因此，为获得蛋白质样品的最佳酶解效果，应对所选择离子液体的种类 和浓度进行系统优化。 参考文献 M，Palkl(’KoelM．Micellar ionic 【l】Borissova electrophoresisusing