产植酸酶黑曲霉Px原生质体的制备与再生.pdfVIP

2010年第 18期 中国饲料 产植 酸酶黑 曲霉 Px 原生质体 的制备与再生 甘肃农业大学食品科学与工程学院 张卫兵 甘伯中 李 帆 郭爱莲 摘【要】本文对产植酸酶黑 曲霉Px原生质体的制备和再生条件进行 了研究。结果表 明：在液体培养条件下培养 18h的茵丝 ，经过 0．3％p一巯基 乙醇与酶液同时处理，采用pH5．0的混合酶 (蜗牛酶：纤维素酶=7：3)在 34℃酶 解 2．5h，选用0．7mol／L的氯化钠为渗透压稳定剂时 ，原生质体形成数和再生率均达到最高，分别为 9．7x10s个／mL 和 28．2％。 关【键词】黑曲霉Px；植酸酶 ；原生质体 ；再生 【中图分类号】$816．35 文【献标识码】A [文章编号】1004—3314(2010)18—0039—03 A【bstract】TheformationandregenerationoftheprotoplastfromAsperigillusno rPxwithhighyieldofphytasewas studied．Afterthemyceliawasgrowingontheliquidculturefor18hoursandconductedwith0．3％ B—mercaptoethanola andcompoundenzymetogetherfor2．5hoursat34℃ ，using0．7mol／LNaC1astheosmoticpressurestabilizer，thehighest yieldofprotoplastandthehighestregenerationratiowere9．7xl0S／mLnad28．2 ％ ．respectively．Thebestconditionofthe compoundenzymewassnailase：celluaseat7：3，pH 5．0． K【eywords】AspergillusnigerPx；phytase；protoplast；regeneration 微生物原生质体诱变技术是工业微生物育种 1．1．3．3 再生培养基 ：酵母膏 2％，葡萄糖 4％， 的主要技术 (Peberdy，1980)。目前 国内外主要采 NaNO30．3 ％ ，KC11．05 ％ ，MgSO4·7H20 0．05％ ， 用传统的紫外线和其他诱变剂对产植酸酶菌种的 FeSO4·7H20 0．001％，KH2PO40．01％，pH 6．0，上 孢子和菌丝处理 ，而对原生质体的研究较少。本研 层含 0．8％琼脂 ，下层含 2％琼脂 ，用 100mL0．6 究是以植酸酶高产菌株黑曲霉 Px为出发菌株 ．研 mol／LNaC1溶液配制。 究原生质体制备的条件与方法，为其进一步诱变 1．1．3．4 低渗培养基 ：酵母膏 2％，葡萄糖 4％， 育种奠定基础 。 NaNO30．3％，KC11．05％，MgSO4·7H200．05％， 1 材料与方法 FeSO4·7H20 0．001％，KH2PO40．0l％，pH 6．0，上 1．1 材料 层含 0．8％琼脂 ，下层含2％琼脂 ，用 100mL蒸馏 1．1．1 菌种 黑曲霉 Px，由本实验室分离筛选。 水配制。 1．1．2 试剂 蜗牛酶 (华美生物工程公司)，纤维 1．2 试验 方 法 素酶 (华美生物工程公司)，B一巯基 乙醇 (华美生 1．2．1 菌丝培养方法 将黑曲霉菌株 Px活化 ，孢 物工程公司)。 子成熟后 ，接种于菌丝生长培养基 ，30℃，摇瓶培 1．1．3 主要培养基