流动注射-分光光度计联用测唾液中的组氨酸.pdfVIP

流动注射-分光光度计联用测唾液中的组氨酸 1 1 1，2 王羽 ，张昭 ，康学军 1)东南大学学习科学研究中心， 儿童发展与学习科学教育部重点实验室， 南京 210096 2)东南大学苏州研究院 苏州环境与生物安全重点实验室 苏州 215123 摘要：根据波利反应，利用亚硝酸钠和对氨基苯磺酸发生重氮化反应，其产物在碱性条件下与组氨酸反应， 形成橘红色溶液的原理，设计了流动注射-分光光度计联用流路，测定唾液中的组氨酸。对流动注射的管路、 分光光度计波长、试剂浓度、反应时间等进行了优化，优化后的方法在5μg/mL到200μg /mL时，线性关系良 2 好，线性方程为y=0.3215x+2.4473 ，相关系数R =0.9979 ，简便快速，测定一个样品不到4分钟。 关键词：波利反应 流动注射 分光光度计 组氨酸 1 前言 组氨酸是神经递质组胺的前体，组胺是自体活性物质之一，在体内由组氨酸脱羧基而成， 其释放，可发挥促平滑肌收缩、血管扩张、增强毛细血管通透性和黏膜腺体分泌等效应，介 导 I 型超敏反应发生。组氨酸又名 α-氨基 β-咪唑基丙酸，属于碱性氨基酸或杂环氨基酸（分 子式如下）。组氨酸对成人为非必需氨酸，但对幼儿却为必需氨基酸。在慢性尿毒症患者的膳 食中添加少量的组氨酸，氨基酸结合进入血红蛋白的速度增加，肾原性贫血减轻，所以组氨 酸也是尿毒症患者的必需氨酸。此外，通过我们的实验，也表明唾液中的组氨酸可能与人体 应激反应有关，因此建立一种快速可靠的组氨酸测量方法十分必要。 组氨酸与其他氨基酸相比，除一些常见的化学反应外，其右侧链咪唑基与重氮苯磺酸能 形成棕红色化合物，即波利(Pauly)反应[1] ，如图 1 所示。 图 1 组氨酸的波利反应 我们可以用比色法来分析这一橘红色产物的含量，从而检测组氨酸的量。 流动注射分析技术(FIA) [2]是丹麦科学家于 1974 年创立的一项新的流动分析技术，是溶液 自动在线处理及测定的现代分析技术。它具有分析速度快、准确度和精密度高、设备和操作 [3] 简单、通用性强、试样和 试剂用量少等一系列优点。FIA 基本流路系统一般包括 :载液驱动 系统、注入阀或进样器、微型反应器、流通式检测器、信号记录装置。流动注射分析法( FIA) [4] 已经与多种仪器分析方法连用 ，包括分光光度法、电感耦合等离子体原子发射光谱法 ( ICP2AES) 、原子吸收光谱法(AAS) 、化学发光法(CL) 、荧光光度法、电化学分析法、生物 传感器、毛细管电泳、免疫分析法等。其中，流动注射-分光光度法检测是应用最普遍的一种  通讯作者:康学军,E-mail ：xjkang64@163.com 126 联用技术[5,6] 。该方法简便,价格低廉,可以方便地与信号处理系统连接。 因此，将流动注射与分光光度计联用可以建立快速、准确的分析唾液中组氨酸的方法。 2 材料与方法 2.1 仪器与试剂 仪器：IFIS-D 型智能流动注射进样器（西安瑞迈分析仪器有限公司）； 723 可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）； AL104-IC 分析天平（METTLER TOLEDO ）； GL -20B 高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂) 试剂：亚硝酸钠，无水碳酸钠，对氨基苯磺酸为分析纯，组氨酸 （sigma ）为标准品，实 验用水为三次水 2.2 试剂的配制 亚硝酸钠溶液的配制：称取 10g 亚硝酸钠固体，在 100