叶下珠水提物对裸鼠人肝癌移植瘤HBx和VEGFR3表达的影响.pdfVIP

Website http：／／xuebao．ahtcm．edu．cn E-mail ahxbbjb@163．tom 安徽中医药大学学报 第 33卷 第 4期 2014年 8月 JANHUIUNIV CHINESEMED Vo1．33 No．4 Aug．2014 73 叶下珠水提物对裸 鼠人肝癌 移植瘤 HBx和 VEGFR3表达的影响 魏春 山 ，唐海鸿 ，王宏艳 ，邢宇锋 ，童光 东 ，周大桥 (1．深圳市中医院肝病科 ，广东 深圳 518033；2．华中科技大学同济医学院感染科 ，湖北 武汉 430074) [摘要]目的 探讨 乙型肝炎病毒 X基因(hepatitisBviruxxgene，HBx)和血管内皮生长因子受体 3(vascu— larendothelialgrowth{actorreceptor3，VEGFR3)基 因与 乙型肝炎相关肝癌的相关性 ，以及叶下株水提物 (aqueousextractofphyllanthusurinariaL，AEP)对 HBx和 VEGFR3蛋 白表达的干预作用。方法 将 6O只Balb／c—nu裸 鼠随机分为 1O组。分别复制转染 HBx、氯霉素 乙酞转移酶(chloramphenicolacetyltrans— ferase，CAT)和 VEGFR3基 因的 HepG2肝癌细胞 的裸 鼠皮下移植瘤模 型，用 AEP进行 干预 ，以生理盐水、 环磷酰胺 (cyclophosphamide，CTX)作为对照，共治疗 6周。观察模型复制后不 同时间各组裸 鼠的移植瘤生 长状况，采用酶联免疫吸附试验检测各组裸 鼠血清 甲胎蛋 白(alphafetalprotein，AFP)水平，采用Western blot方法检测移植瘤组织中HBx和 VEGFR3蛋 白表达水平 。结果 肝癌移植瘤模型复制成功。各组裸 鼠 体质量均随着时间显著增长。实验结束 时，接种 HepG2一HBx细胞的各组 中，AEP处理组肿瘤质量显著低 于 CTX处理组 (P0．05)，其 AFP水平显著高于NS处理组 (P0．05)，其移植瘤组织中HBx表达水平显 著低 于NS组 (P0．05)。接种相 同肝癌细胞的各组中，AEP处理组VEGFR3表达水平最低 ，但与 CTX组 VEGFR3表达水平比较 ，差异无统计学意义(P0．05)；AEP组和 CTX组VEGFR3表达水平显著低 于NS 组 (P0．05)。对于相同的处理因素，接种 HepG—HBx细胞和 HepG～CAT细胞的裸鼠移植瘤组织中VEG— FR3表达水平均显著低于接种 HepG—VEGFR3细胞的裸 鼠(P0．01)。结论 AEP通过直接抑制 HBx蛋 白和 VEGFR3蛋 白表达，及通过抑制 HBx蛋 白表达而间接抑制 VEGFR3蛋白表达，达到对肝癌移植瘤生 长 的抑制作用 。 [关键词]叶下珠 ；乙型肝炎病毒 x基 因；血管 内皮生长因子受体 3；肝癌 [中图分类号]R285．5 [文献标志码]A [DOI]10．3969／j．issn．2095—7246．2014．04．025 目前认为，乙型肝炎病毒 X基 因 (hepatitisB 录病毒转染法构建，液氮冻存于本院中心实验室。 virusXgene，HBx)对于乙型肝炎相关肝癌 的形成 AEP，由本课题组采用乙醇水提取法制备 口]。环磷 和进展起到关键作用，而肿瘤的生长和转移赖 以血 酰胺 (cyclophosphamide，Cytoxan，CTX)针剂 (江苏 管 内皮生长 因子受体 (vascularendothelialgrowth 恒 瑞 医 药 股 份 有 限 公 司，国 药 准 字 号 为 factorreceptors，VEGFRs)，其中VEGFR3主要作 批 号。裸 鼠(Balb／c—nu裸 用于淋巴通路l1]，其与 HBx是否存在相互作用及其 小 鼠)6O只，购 自南方医科大学实验动物 中心 (实验 机制尚不得而知 。本研究通过复制转染 HBx基因、 动物生产合格证号：SCXK(粤)2006—0015；编号 ： VEGFR3基因和氯霉素 乙酞转移酶 (chloramphenicol 0083740)，4周龄 ，雄性 ，体质量 lO．87～17．21g。 acety1transferase，CAT)基因的肝癌皮下移植瘤模型，