TGase+1，ACPase及APLPase+A酶活性参与脱屑机理和异常脱屑疗效的探讨.pdfVIP

中华医学会第十四次全国皮肤性病学术年会·实验 TGase 1，ACPase及APLPaseA酶活性参与 脱屑机理和异常脱屑疗效的探讨 谷大磊李红文吴景兰 郑州大学第一附属医院皮肤病与性病科(郑州450052) 本研究采取板层鱼鳞病(LI)和寻常银屑病患者的鳞屑铺片标本，以健康人为对照，应用组织／细胞 化学方法进行转谷氨酰胺酶1活性，酸性磷酸酶活性和酸性磷脂酶A活性检测，进一步探讨表皮脱屑 的机理。并对u志愿者(对个别重度u患者进行TGase1基因测序)的局部皮肤每日一次施以低浓度 的乙醇酸一甘油，对异常脱屑(呈片状磷屑)患者进行初步疗效观察，为异常脱屑患者的临床治疗提供 实验基础。 材料与方法 · 志愿者收集皮屑标本，低温保存。另对一例重症u患者抽取10ml静脉血用枸橼酸钠抗凝后送基因公 司检测TGMl基因序列。 2．不同浓度乙醇酸对不同程度的异常脱屑u患者的应用方式：以乙二醇为溶剂，36％的乙醇酸为 溶质，配成不同浓度的乙醇酸溶液。对重度Ⅱ患者应用终浓度34％的乙醇酸一甘油(50％甘油)；对 中、轻度u患者应用1—2％的乙醇酸一甘油，每日一次局部外用。 3．显示酸性磷酸酶活性(硫酸铅法示酸性磷酸酶)： 2．5ml+lml8．5％NaCl+0．IN 2％beta甘油磷酸钠2ml+O．6％MgSO。0．5ml以1NHCI调至pH5．6，用前过滤。)滴在玻片上，置37。G S1—2rain流水_÷洗5Illin-÷显微 温箱4h一蒸馏水洗_l％醋酸作用30s一蒸馏水洗3次—+2％(NH4)2 镜下观察照相(同时做不加底物培育的阴性对照)。 4．TGase l酶活性的检测：首先制备鳞屑铺片标本和HRP(辣根过氧化物酶)一单丹酰偶联物 (HRP—MDC)；HRP—MDC的制备和检测TGase酶活性如下：①活似氧化HRP以过碘酸活似氧化 ca- ml daverine，Sigma，US)溶于1 mmol／L 性：A液0．05mol／LTris—HCI(pH8．0)，10 过夜孵育各鳞屑铺片标本，DAB显色。⑤同时做不加底物孵育的阴性对照。⑥显微镜下观察，照相。 5．显示酸性磷脂酶A活性 5．5)_+将 作用底物(1％卵磷脂水溶液10ml、2％氯化钙水溶液10ml、0．1M甘氨酸缓冲液，pH 底物滴在玻片上37。C浸渍1536h叶蒸馏水洗2—3 Ⅱlin一显微镜下观察照相(同时做不加底物培育的阴性对照)。 ’ 6．统计学分析实验数据应用图像分析仪(Shan 统计学软件行单因素方差分析。实验数据以均数±标准差(x-I-s)表示，以口=0．05为检验显著性水准。 结果 (T)缺失，而导致移码突变。 ．．．——368．．．—． 中华医学会第十四次全国皮肤性病学术年会·实验 一定改善。 3．健康人ACPase酶活性呈黑色细颗粒主要定位于KC的细胞间桥，异常脱屑患者酶活性呈非特异 的灰色，活性缺乏或缺如，很少见到细胞间桥处呈酶活性。 4．健康人TGasel酶活性呈棕色细颗粒定位于KC表面，异常脱屑患者酶活性皆缺乏或缺如。· 5．健康人APLaseA酶活性呈兰色细颗粒定位于KC细胞间表面。异常脱屑患者酶活性皆缺乏或 缺如。 维生素C和维生素PP对原代培养人角质形成细胞的效应 王菲菲李红文吴景兰 郑乃刚 王一菱 1．郑州大学第一附属医院皮肤科(郑州450052)； 2．郑州大学基础医学院分子细胞生物学研究