抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选与鉴定.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( *# 年 月 $%% !! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +(,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 抑制肿瘤坏死因子 的 适配子的筛选与鉴定 !! #$ 郭克泰 严馨蕊 黄国锦 徐春晓 柴映爽 张智清 （中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所基因室，北京 !%%%4$ ） 摘 要 应用F9G9H 技术筛选能与5+6 结合的I+3 适配子。化学合成随机寡聚I+3 库，以5+6 为靶蛋白，经过 轮 筛选，将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚 适配子，用生物素 亲和素 辣根过氧化 !$ F9G9H I+3 1 1 物酶显色系统检测适配子与5+6 的结合活性；用鼠G$ 细胞检测适配子拮抗5+6 活性。结果显示，所筛选到的寡 聚I+3 能与5+61 高亲和力结合，并能在细胞培养中拮抗5+61 的细胞毒活性。 ! ! 关键词 ， ， ，结合活性 F9G9H 5+61! 7AE7.-0 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） JK4# 3 !%%%1%#! $%% %#1%K%1%L F9G9H 是“配体通过指数富集达到系统进化” 研究。 （ FMNE-.7E:C -,()BE:(= (O ):7=PN /M -8A(=-=E:7) -=0:C1 % 材料和方法 .-=E ）的缩写，是由5B-0Q 和R()P 在!% 年分别研究 ［］ 出的一种新型体外筛选技术! ，用于研究小分子核 % % 寡聚#$ 库的构建与引物的合成 酸与靶物质相结合的部位、序列及空间构象。经 寡聚随机 I+3 库由大连57U7S7 公司合成，两 筛选出的配体称为适配子（ ）。目前， 端为固定序列以便 扩增，中间 个为随机序 F9G9H 3AE7.-0 VWS L% 该技术已被成功地用于筛选各种靶物质的结合序 列的单链 ： （ ） I+3 4X1RRR 3RR 3WR 35R 553 + L% ［］ 列，包括小分子、肽、单体蛋白、核酸、病毒等等$ 。 !#