PCRELISA技术在寄生虫病研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 医学寄生虫病分册 2005年 7月第 32卷第 4期 ForeignMed ￡笪 ! ，』 ：Q ： ： · 177 · · 综 述 · PCR—ELISA技术在寄生虫病研究中的应用 李健 杨秀珍 刘佩梅 摘要 PCR—ELISA是在 PCR基础上结合分子杂交技术和免疫学技术的一种新的检测手段 ，该文就 其原理，特点及其在寄生虫病研究中的应用加以概述。 关键词 PCR—ELISA；寄生虫病 寄生虫病是危害人和动物的较为严重的一类疾 称。许 多文献也称之为 PCR一酶免疫测定 (poly— 病 ，特别是在热带和亚热带的发展中国家尤为突出； merasechain reaction—enzmy e imrnunoassays．PCR— 另外，一些机会性寄生虫感染在发达国家也为数颇 EIA)[5]；还有的称之为PCR一酶联扩增子杂交试验 多。因此，联合国计划发展署 ／世界银行 ／世界卫生 (polymerasechain raection—enzmy e—linked amplicon 组织特别规划要求 防治包括疟疾 、血吸虫病 、丝虫 hybridizationassay，PCR—ELAHA)L ，PCR—DNA酶 病、利什曼病和锥虫病等流行广泛、后果严重的多种 免疫测定 (polmy erasechainreaction—DNA enzmy e 寄生虫病。为有效防治寄生虫病 ，建立快速准确的 immunoassay，PCR—DEIA)lJ或 PCR一微 孔板 杂交 诊断方法成为当务之急。多年来，人们常规使用的 (polymerasechainreaction—microplatehybridization， 检测方法主要是病原学和免疫学方法，这些传统方 PCR—MPH)J。尽管名称不一，但其原理基本相同。 法因其敏感性低、取材困难、耗时长等缺点而影响其 PCR—ELISA是一种在微孑L板上对 PCR产物进行的 应用。随着分子生物 学的发展，聚合酶链反应 快速、非放射性检测。首先，提取样本基因组 DNA， (polymerasechainreaction，PCR)技术开始应用于多 根据特异基因序列 (模板DNA)设计的引物进行特 种寄生虫病的诊断，并因其高度敏感性和快捷性而 异扩增。在扩增的同时，给PCR产物加上某种特殊 受到许多研究人员的青睐，但 由于使用 电泳技术检 标记 ，然后令该PCR产物与事先标记的捕获性探针 测 PCR产物，对结果的判定存在主观性误差，再加 (该探针能与模板DNA内部某段序列互补结合)进 上有毒指示剂的污染性，使其应用受到一定限制。 行杂交，再加入酶标抗体反应，最后加入底物显色， 近年来，人们在 PCR的基础上，联合分子杂交技术 测定OD值，以此方法检测某种特定基因的存在。 和免疫诊断技术建立 了 PCR一酶联免疫吸附试验 1．2 样本 DNA的提取 (PCR—enzymeimmunosorbentassay，PCR—ELISA)。 PCR—ELISA技术的第一步就是从待测样本中 该技术因其比PCR更高的敏感性和特异性引起了 提取DNA。从各种样本中提取高质量、高数量的 人们极大兴趣，并开始广泛应用于许多领域，如在肿 DNA是该技术成功的关键之一，也是提高其灵敏度 瘤治疗研究中，以端粒酶作为药物的靶 目标，用 的至关重要的一步。在用 PCR—ELISA检测寄生虫 PCR—ELISA方法监测端粒酶活性，以观疗效 ；在 感染时，样本可来 自肝脏、大脑、肾脏等组织，也可来 对细菌l、病毒 引【、衣原体lj等微生物诱发的疾病 自血液，还可来 自腹水、羊水、脑脊液、眼