HIV-1 Tat真核表达载体的构建及在内皮细胞的表达.pdfVIP

实用 医学进修 杂 志 　2 00 8年第 3 6 卷第 3 期 JOURNAL OF PRACTICAL TRA NI NI G OF M D ICIN Vol136 No13 Sep 12008 · 64·1 H I V 21 Tat真 核 表 达 载 体 的 构 建 3 及 在 内 皮 细 胞 的 表 达 史继静 　刘朝奇 　杨 　凡 　柳发勇 　韩 　钰 三峡大学 分子生物学研究所 (宜昌 443002) 摘 　要 　 目的 : 构建 H IV 21 Ta t 真核表达 质粒 , 为研 究 Ta t在 H IV 21 致病机 制 中的作 ( ) 用奠 定实验 基础 。方法 : 以 p CV 1 ta t an d rev 质粒 为模 板 , 用 PCR方法扩 增 H IV 21 Ta t基 因 , 克隆至 p cDNA 3. 1 ( + ) 表达 载体 , 酶切 及 测序 鉴 定 重 组体 。重 组质粒 转 染 CV 30 4 细胞 ,用 R T2PCR 、转 染 H IV 21 L TR 荧 光报 告基 因 的 方法检 测 t at 基 因 的表 达及 活性 。结 果 :经 酶切及 测序鉴 定 , 成 功构建 p cDNA 3. 1 ( + ) 2Ta t重 组质粒 。重 组体 转 染 CV 304 细 胞 ,建立 稳 定表达细胞株 , 应 用 RT 2PCR 可检 测 到 T at 基 因 m RN A 的表达 ;荧光仪检 测 Ta t 蛋白可 明显促进 荧光 素酶在 CV 30 4 细胞 内的表达 。结论 : 成 功构建 H IV 21 Ta t真核表达 载体 ,并建立 了 H IV 21 Ta t 内皮细胞稳 定表达细胞株 。 关键 词 　H IV T at基 因 ; 真核表达载体 ; R T2PCR; H IV 21 L TR 2Lu c报 告基 因 C lon in g o f Ta t G en e of H IV 21 in to a M am m a l ian x p r e ss ion V ec tor an d in V it r o x p r e ssion Stu d ie s Sh i J ij in g　L iu Zhaoq i　 Yang Fan g, et a l. In stitu te o fM o lecu la r B io lo gy, Ch ina Th ree Gorge s Un ive rsity, Y ichan g 4 4 3 0 0 2 , Ch ina Ab str a ct 　O b j ec t ive : To con struc t a eu k aryo tic exp re ssing vec to r p cDN A 3. 1 ( + ) 2Ta t for fu rth e r stud in g Tat p rote in fu nc tion in p a thgen e sis of H IV 21. M et h od s: Th e fu ll length gen e frag