牙菌斑形成早期微生物定植规律的定量PCR研究.pdfVIP

中国微生态学杂志2014年9月第26卷第9期 ChineseJournalofMicroecology，Sep．2014，Vo1．26No．9 1031 · 口腔微生态学 · 牙菌斑形成早期微生物 定植规律的定量 PCR研究 刘红春，欧阳勇，涂家珍 中山大学光华 口腔医学院附属 口腔医院，广东省 口腔医学重点实验室，广东 广州 510055 摘要：目的 观察牙面彻底清洁后24h内牙面上定植的变异链球菌、伴放线放线杆菌和总微生物的数量 变化。方法 8名健康成人接受全 口洁治后，分别于6、12和24h收集龈上菌斑，提取菌斑内细菌的基因 组DNA。设计变异链球菌、伴放线放线杆菌和总菌特异性引物，获得 目的基因，克隆于大肠埃希菌 DH5a 感受态细胞 ，测序后获得质粒标准品。将样本和梯度稀释的质粒标准品进行SYBRGreenI实时荧光定量 PCR检测，绘制标准曲线，确定样本中变异链球菌、伴放线放线杆菌和总菌DNA拷贝数。结果 牙面彻 底清洁6h后即有大量变异链球菌定植 ，变异链球菌拷贝数 占总菌的0．32％，24h后增加到0．67％。 12h时定植的变异链球菌拷贝数高于6h，差异有统计学意义(P=0．031)，24h后继续增加 (P：0．024)。 12h时定植的总菌拷贝数高于6h，差异有统计学意义(P=0．004)，24h后继续增加 (P=0．042)。牙菌 斑中伴放线放线杆菌的拷贝数低于 10。结论 早期牙菌斑 中12h定植的变异链球菌和总菌数量高于 6h，且24h内不断增加 ，仅有少量伴放线放线杆菌定植。 关键词：实时荧光定量PCR；牙菌斑 ；细菌 中图分类号：R378 文献标志码：A 文章编号：1005-376X(2014)09—1031-04 DOI编码 ：10．13381／j．cnki．cjm．201409010 Earlybacterialcolonization in dentalplaqueinvestigatedby rea1．timefluorescencequantiattivePCR LIUHong—chun，OUYANGYong，TUJia—zhen DepartmentofPreventiveDentistry，GuanghuaSchoolof Stomatology，HospitalofStomatology，SunYat—senUniversity， GuangdongProvincialKeyLaboratoryofStomatology，Guangzhou510055，China Correpsondingauthor：LIUHong—chun。Email：hongchun751@ sina．con Abstract：ObjectiveToobserveearlycolonizationofStreptococcusmutans(S．mutarb$)，Aggregatibacteractino— mycetemcomitans(A．actinomyeeterncomitans)andtotalbacteriaindentalplaqueusingreal—timefluorescence quantitativepolymerasechainreaction(qPCR)．Methods Supragingivalplaquesamplesfrom8healthyadults werecollected6，12and24hoursafteracompleteprophylaxis．Thetotal ge