活细胞线粒体中SO2-3HSO-3的荧光成像.pdfVIP

Vo1．35 高 等 学 校 化 学 学报 No．12 2014年 12月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 2534 ～254l 活细胞线粒体 中so一／HSO3的荧光成像 姜 娜，樊江莉，张 帅，彭孝军 (大连理工大学精细化工国家重点实验室，大连 116024) 摘要 在五甲川菁染料的基础上 ，合成了一种新型的中位溴取代的五甲川菁染料 Cy5一Br，其结构通过质谱 和核磁共振波谱表征．性能测试结果表明，该染料作为荧光探针的发射波长可达665nm，具有较低的细胞毒 性，而且对二氧化硫衍生物 s0j一和HSO；具有很好的选择性．该探针在665am处的荧光发射强度随着 s0一／HSO~浓度的增加不断降低，具有 良好的线性荧光响应．Cy5一Br可以进入活细胞线粒体，对 s0；一和 HS0j的浓度进行实时共聚焦荧光成像． 关键词 亚硫酸根 ；亚硫酸氢根；线粒体；荧光成像 中图分类号 0657 文献标志码 A 二氧化硫是常见的气体污染物，通过呼吸作用吸入的二氧化硫很容易在呼吸系统内与水结合生成 HsO，，再通过水解作用最终形成衍生物s0；一和HSO；．医学研究表明，暴露在过量的二氧化硫环境中 不仅会刺激呼吸系统，还会导致肺癌、神经错乱及心血管等疾病 ¨J．二氧化硫的毒性主要是由s0一 和HSO；这2种亚硫酸盐衍生物体现 ，因此亚硫酸盐的用量在很多国家都有严格的控制标准．例如 美国食品添加剂专家联合委员会建议人体每 日亚硫酸盐允许摄人量应低于0．7mg／kg_4J．因此检测生 物体内亚硫酸盐(sol一和HSO；)的含量具有重要的生物学和医学意义． 目前，检测亚硫酸盐的方法有高效液相色谱法、电化学分析法和离子色谱法等 j，这些方法存在 设备昂贵、操作复杂(如样品需预处理)及灵敏度低等不足．荧光分析法因具有较高的灵敏度，方便快 捷等优点，近年来在生物化学、医学分析和环境监测等方面受到广泛的关注 7． 近年来，一些能够应用于检测亚硫酸盐(sol一和HSO；)的荧光探针已见报道 “，该类探针主 要基于sO；一和HSO；对醛基和乙酰丙酸类物质的专一性反应．但是，基于醛基的加成反应通常需要在 酸性条件下进行，并有可能受到半胱氨酸和高半胱氨酸的影响；而乙酰丙酸型探针中的酯链有可能被 蛋白酶等分解，因此在生物成像过程中会产生较高的背景干扰信号．Guo等 报道了一种利用香豆素 半花菁染料共轭链上的Ot，一不饱和结构与sol一／HSO；发生加成反应¨的荧光探针，该探针不仅检测 条件温和，而且首次实现了亚硫酸盐在活细胞 内成像．另一方面，线粒体是细胞 “能量工厂”，几乎存 在于所有的真核细胞 内，参与细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细 胞周期的能力．线粒体内亚硫酸盐含量异常会影响其功能进而导致机体疾病的发生．例如在小白鼠的 海马趾神经元中，二氧化硫及其衍生物能够改变钠和钾离子的通道功能，打破细胞内的氧化还原平 衡，对机体造成伤害．迄今，能够定位于线粒体的该类探针尚未见报道． 五甲川菁染料(Cy5)的吸收波长和发射波长在 650～700nm之间，是波长最短的近红外菁染料， 具有 良好的生物应用前景 ．由于线粒体表面存在一180mV的膜电位，使得苄基苯并噻唑季铵盐修 饰的染料能够选择性定位于线粒体 8’J．本文选取五甲川菁染料为母体，合成了一种中位溴取代，苄 基苯并噻唑季铵盐修饰的荧光染料Cy5．Br，其发射波长接近近红外区[在 V(PBS)：V(CHCN)=8：2， pH=7．4体系中其荧光发射波长为665nm]．实验结果表明，该探针不仅可在体外检测 so2,一和HS03， 收稿 日期 ：2014-06．13．网络出版 日期 ：2014．1017． 基金项 目：国家 自然科学基金(批准号、教育部新世纪优秀人才支持计划 (批准号：NCET一12-0o8o)、辽宁省 自然科学 基金 (批准号：2013020115)和中央高校基本科研业务费资助项 目(批准号：DUT14ZD214)资助． 联系人简介：樊江莉，女，博士，副教授，主要从事荧光染料的合成与应用研究．E-mail：fanjl@dlut．edu．cn