RP-HPLC柱前衍生化测定熊去氧胆酸的含量.pdfVIP

维普资讯 第33卷第4期 西南民族大学学报 ·自然科学版 Aug ． 2007 JournalofSouthwestUniversityforNationalitiesN·aturalScienceEdition 文章编号：1003-2843(2007)04-0821-03 RP—HPLC柱前衍生化测定熊去氧胆酸的含量 杨学军，仇丽颖，钟米娜，李琴 (西南民族大学化学与环境保护工程学院，四川成都 610041) 摘 要：采用反相高效液相色谱柱前衍生化法测定熊去氧胆酸的含量．衍生化条件 ：以猪去氧胆酸为 内标，溴苯乙酮为 衍生化试剂，三乙胺为催化剂，8o*C温度下反应 30min．色谱条件：色谱柱为 Symmertu—C18柱(250*4．6mm，10rtm)， 流动相为甲醇．水(85：15)，检测波长为254tim．结果熊去氧胆酸线性范围为0．02—10mmolL·一，r=0．9998，重复性试 验RSD=2．91％( )．所建立的反相高效液相色谱柱前衍生化法能准确测定熊去氧胆酸的含量，重复性好． 关键词 ：RP．HPLC；柱前衍生化；熊去氧胆酸；猪去氧胆酸；溴苯乙酮 中图分类号：R284 文献标识码：A 熊去氧胆酸(Ursodeoxycholicacid，UDCA)是一亲水性二羟基胆酸(化学结构：3a，7p二羟基一5p胆烷酸)． 1902年，Hammersten发现熊去氧胆酸是黑熊胆汁中的主要成分 J【J，另有研究发现有少量的存在人体的血浆中’， 其广泛应用于治疗胆汁郁结，原发性胆汁性肝硬化，慢性肝炎等各种胆疾病和消化道疾病[21．因为熊去氧胆酸 结构上没有紫外吸收基团，为使其能够在紫外检测器中检测必须经过衍生化 3【】，因此本文采用溴苯乙酮为衍生 化试剂，三乙胺为催化剂，考察了衍生化试剂用量、催化剂用量、反应时间、反应温度四个因素对衍生化结果 的影响，最终建立了反相高效液相色谱柱前衍生化测定熊去氧胆酸含量的方法．该法简便、准确，重复性好， 灵敏度较高，尤其适用于含量较低的制剂的分析检测． 1 实验部分 1．1 仪器与试药 LC一10Atvp型高效液相色谱仪(日本岛津)，ChromTek色谱工作站(美国Alltech公司)，色谱柱为 Hypersil Cl8(250x4．6mm ，10I．tm)．sHA—c往复式恒温振荡器(金坛市正基仪器有限公司)，HH一2数显恒温水浴锅(国华 电器有限公司)，xw一80A漩涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)．熊去氧胆酸对照品(西南民族大学制药工程教研 室精制，含量99．8％)，熊去氧胆酸原料(上海友盛化工科技有限公司，批号：060401，060402，060403)，猪去 氧胆酸原料(I~)IliE东制药有限责任公司，060201，95％)，溴苯乙酮(美国ACROS，organics，98％)，水为重蒸 馏水，甲醇、乙腈为色谱醇 ，其它试剂均为分析纯． 1．2 方法与结果 1．2．1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇．水(85：15)为流动相；检测波长为254nm．理论板数按熊 去氧胆酸峰计算应不低于3000，熊去氧胆酸峰、猪去氧胆酸峰与相邻杂质峰的分离度符合药典要求． 1．2．2溶液的配制 熊去氧胆酸对照品储备液的配制：取熊去氧胆酸对照品约0．2g，精密称定，置 50ml量瓶中，加甲醇溶解 并定容，摇匀，置4℃冰箱中保存． 收稿 日期 ：2007．05．10 作者简介：杨学军(1964．)，女，西南民族大学化学与环境保护工程学院实验师 通讯作者：仇丽颖(1980-)，女，西南民族大学化学与环境保护工程学院助教． 维普资讯 822 西南民族大学学报 ·自然科学版