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适当比例的DNA：脂质体混合物能显著增强DNA疫苗的免疫鼓果 适当比例的DNA：脂质体混合物 能显著增强DNA疫苗的免疫效果 陈晓光’ 冯明铡2龚娅1杨培粱1 昊昆1 (1第一军医大学寄生虫学教研室广州5t0515) 摘要：腈质俸能否加强DNA疫苗的免疫效果，一向颇有争论。本文应用一系列具有不同比 倒的嫡码弓形虫主要表面抗原的质粒DNA：魔质体混合物克疫小鼠．并时不同衄小置的抗体产生 情况进行了分析比较。媾果显示：不同蛆小最的特异抗体滴度有很太不同，只有一定比例的DNA： 脂质体混合物才能有效激发体液免疫；适量比例的DNA：脂质体混各物能提高特异抗体的滴度、提 前特异抗体出现的时间，还能太大降低DNA的用量。本研究尚揭示；一定量的删A对于有效免疫 的激发是必须的，但井不是越多迪好。加强注射可以增加免疫反应性，但三次以上适乎没有必要一 奉研究蛄果对类似的DNA免疫研究具有一定的借鉴作用。 关t词：脂质体Dm免疫弓形虫 DNA疫苗是加世纪90年代才发展起来的新技术，是将编码特异性抗原的基因以某种途 径直接接种于机体，以诱导特异的免疫应答．从而对机体实施保护作用。特异免疫的产生是由 于机体细胞吞噬了DNA后，外源基因在细胞内表达并将抗原释放到细胞外造成的1。DNA疫 苗具有以下优点： (1)模拟减毒活疫苗产生全身性保护性免疫反应，不需使用活的微生物就可产生CIL 反应。 (2)宿主细胞能原位表达基因，引导合成的蛋白比原核表达系统更接近天然分子，这种免 疫原有更适宜的抗原决定簇(表位)，从而能诱导更有效的反应。 (3)免疫具有持续性，一次接种可获得长期免疫力，避免了死疫苗、重组亚单位疫苗等需反 复多次加强免疫的繁琐。 (4)制备简单，成本较低，等等。 DNA免疫的潜在缺点为：仅有一少部分肌肉细胞能吞噬DNA，DNA直接暴露在间液的核 酸酶中，需要大量的DNA(约50一：oot,g／d,鼠)，为增强免疫力常需要注入肌肉再生刺，等等。 脂质体由阳离子脂和中性辅脂组成，通常用于介导质粒DNA转染培养的细胞。带净正电 荷的脂质与带负电荷的DNA之间相互作用，自发形成了脂质一DNA复台物。中性的脂质能增 加脂质体的稳定性、减少细胞毒性、增进转染效率。脂质体一DNA复合物能与细胞表膜和细 胞内膜直接融合或通过内吞作用进人细胞。脂质扩散人靶细胞膜的过程，破坏了膜与DNA间 的相互作用，从而使DNA进入细胞浆。带正电的脂质一DNA混合物已被成功用在活体动脉 内、静脉内及气管内转染细胞上12,3,41。 体外细胞转染时，为了获得较高的转染效率，脂质与DNA的比率是非常重要的，体内转染 时是否也是如此呢?弓形虫主要表面抗原是存在于弓形虫表面的一种膜蛋白，已被证明具有 良好的免疫原性[5·“。在本研究中，我们应用一系列具有不同比率的脂质体与含弓形虫P30 ·235· 第二届广东青年科学家论坛论文集 编码基因的质粒DNA复合物，肌肉内注射免疫小鼠，并对免疫后小鼠的抗体产生情况进行r 测定。目的是评定：脂质体是否能增强DNA疫苗的体液免疫散果，以及脂质体与DNA的比率 是否对其的增强作用至关重要。 1材料与方法 (1)质粒构建：本课题组已将弓形虫主要表面抗原(P30)的编码基因克隆并在大肠杆菌及 昆虫细胞中表达-718一。本研究将此基因片段亚克隆到真核表达载体口cFP—N1(cJ。nfe。h。 DNA，以无菌生理盐水溶解并定量。 (2)动物：本试验中所用小鼠均为6～8周龄的雌性BALS／e小鼠。 (31分组： Ho0r Noof 胁。 陆【DNA)pG肝一^1一p30DMRIE—C PBS ～d畔 ，‘脚枷’ GnmpMk(．DNA：llpid)(州r肿慨) (1州阻)‘ (1p∥出) (p田4)黜叠幽 l 55∥mu… l】J 2