崇明白山羊超数排卵与胚胎冷冻初步研究.pdfVIP

叶1闰畜牧兽医学会动物繁殖学分会第卜四幅学术研讨会论文集 崇明白山羊超数排卵和胚胎冷冻初步研究 戴建军k。，张德福u，吴华莉¨，吴彩凤¨，乔建宁3，黄松明3 l上海农业科学院畜牧兽陕研究所；2上海农qk遗传育种重点实验窀动物遗传工程研究室，上海201106： 3上海市崇明县动物疫病预防控制中心，上海崇明 202150 摘要目前胚胎移植技术已经成为人们讨论和研究的热门话题。它有许多延伸技术，如转基因技术、体外受精技术、胚胎分割技术 等。它们的研究都已经取得了很重大的成果。超数排卵作为胚胎移植技术中首要的、也是非常重要的环节正引起了人们的广泛重 视。胚胎的冷冻保存可以使胚胎移植不受时间和地点的限制，胚胎的运输代替种畜的进出口，可节约购买和运输活畜的费用。本 文主要介绍了崇明白山羊的超数排卵、胚胎冷冻过程和其中的一些注意事项。 关键词超数排卵，冷冻保存，崇明白山羊 超数排卵在家畜移植中，特别是单胎家畜的移植中具有十分重要的作用，它能让一头优良母畜一次排出大量的 卵子，以充分发挥其卵母细胞的利用率，最大限度的利用其优良品质。超数排卵是胚胎移植过程的一个重要环节，也 均10．8士1．2个排卵数【“。 冷冻保存中最有应用前景的方法。 崇明白山羊由于生长缓慢等一些缺点，饲养量迅速下降，如不采取措施，不久的将来它将可能从上海消失。因 此，如何保护和扩大该种质资源，已经成为一项迫切的研究任务。 的方法对崇明白山羊进行超排处理，并利用程序化和玻璃化方法对其胚胎进行冷冻保存。 l材料与方法 1．1实验动物和药品 公司生产，FSH有新西兰产和宁波市激素制品有限公司两种，PG—CL和HCG均为宁波市激素制品有限公_J生产。 1．2超数排卵处理 在发情周期的任何一天阴道内置入CIDR，以放置当天记为第0d，在放置12d时，开始以4d共8次肌肉注射 FsH，总片j量为进口FSH9ml／只，国产FsHl80Iu／只，用量每天递减。在第15 同时肌肉注射PG．CLO．1 h发情。次门起每天上下午用带试情袋的试情公羊 m∥只。一般山羊在取出情酮栓后24-48 进行试情，一般发情后即进行配种，并于配种前30min肌肉注射HCG500Ⅳ。每隔8—12h再配种一次，直到发情结 束为止。(见表1) 表l：山羊的超数捧卵方法 1．3手术冲胚和排卵点观察 本试验采用手术法回收胚胎。供体羊去栓后第8d手术采胚。术前禁食半日，羊前低后高仰卧保定。全身麻醉和 局部浸润麻醉。乳房前腹中线开口，切口8cm左右。按常规方法打开腹腔，拉出卵巢子宫，观察记录黄体或卵泡数。 在一侧子宫角中部大弯处用止血钳尖端刺透子宫壁，伸人冲胚导管，向导管气囊打气3～5mL。注射器吸人预热的冲 卵液2啦30tnL并用钝形针头从子宫角尖端插人，当确认针头在管腔内进退通畅时，用套有胶管的肠钳夹在此入针 项日基金：上海市科学技术委员会崇明专项：07DZl9603 作者简介：戴建军(1979一)，男，}L苏靖il：人，研究实爿员，主要从事动物胚胎工程方面的研究。 通讯作者：Tel：86—2lE-眦il：zhangde如lO@yaIloo．com．cn 61． 中困畜牧丹医学会动物黎疆学分会第十p叭}l学术司f讨会论文集 处，推注冲卵液。冲卵液经冲胚导管收集r检卵杯内，最后用两手拇指和食指将子宫角持一遍，’止冲胚液完伞排出。 用同一法冲另一侧子宫角。采胚完毕后，用37℃灭菌生理盐水湿润母羊子宫，冲去凝血块，再涂少许灭菌液体石蜡， 将器官复位。腹膜、肌肉缝合后，撒双抗以抗菌消炎。皮肤缝合后，在伤口周围涂碘酒消毒。供体羊肌注青霉素160万 叫和链霉索100万IU。 1．4胚胎回收 miIl后，吸取底部液体，于解剖镜下进行检胚，并进行质量鉴定，A、B级胚胎用于程 回收到的冲胚液，静置lo~15 序化和玻璃化冷冻保存。 1．5程序化冷冻保存 胚胎先分别在3％和6％的乙二醇(EG)中处理5mm，然后移入lO％的EG中，装管后放入程序化冷冻仪中开 始冷冻。冷冻程序为：20℃到．6．5℃时，降温速度l℃／miIl；．6．5℃人工植冰