家兔死后血液ATP降解规律及其在死亡时间推断与应用.pdfVIP

ForensicandPractice 一17一 On Theory Symposium 家兔死后血液ATP降解规律及其在死亡时间推断中的应用 孙婷怡1 张海东2杨天潼2刘良1 (1．华中科技大学同济医学院法医学系，湖北武汉430030： 2．中国政法大学证据科学教育部重点实验室，北京 100040) l摘要1 目的研究家兔死后血液ATP含量随死亡时间(postmortem 断中的应用。方法建立家兔空气栓塞致死模型，取右心室血液，在0--72h内于死后不同时间应用荧光快速检测技术检 测血液ATP含量，对所得数据进行统计学分析。结果25C恒温环境下，家兔死后初期血液ATP含量升高，于死后第 8h达到峰值，之后随PMI延长而持续下降，56--72h 10。5x3+o．002x2- 用于PMI推断。 f关键词】法医病理学；ATP；死亡时间；荧光快速检测技术 ATP是生物体内的供能物质。血液ATP绝大部分来自红细胞。死亡发生后，ATP的生成与消耗失衡。随 interval，PMI)延长，血液A1rP含量逐渐减少，呈现一定的变化规律。 着死亡时间(postmortem 目前检测ATP含量主要应用ATP荧光快速检测技术。该技术是依据萤火虫发光原理研制，即有氧条件下， 通过发光计检测荧光强度，读取相对荧光值(relativelight 广泛应用于食品卫生监测、酒店管理、医院病菌防控等专业[2-03，但未见将其用以检测尸体血液ATP含量从 而推断PMl的报道。 立PMI推断的最佳回归方程，探讨此方法在法医学实际检案工作中的优势。 1材料和方法 1．1实验动物及取样 死亡即刻取右心室血液5ml，放置于25℃恒温水浴槽中待检。 1．2实验仪器和试剂 仪器：BHP9505．04型ATP快速检测仪(北京滨松光子技术股份有限公司)。 试剂：细胞裂解试剂组(TRA)、荧光反应试剂组(LLR)(北京滨松光子技术股份有限公司) 1．3方法 1．3．1 ul待测全血置于无菌EP管中，与去 样品制备在死后072h内，每4h从25。C恒温水浴槽中取出50 离子水按照l：20比例稀释、混匀，取501．t1样品放人比色杯。 p ul荧光反应试剂(LLR)将比 1．3．2血液ATP的检测在比色杯中依次加入200l细胞裂解剂(矸认)、50 色杯放入ATP快速检测仪，记录仪器屏幕显示的相对荧光值(RLU)。 1．3．3 tool、101．ttool、lu ATP标准曲线用双蒸水稀释制备100It ll 在比色杯中依次加入5 l稀释后的ATP溶液、50ul荧光反应试剂(LLR)，用荧光检测仪检测RLU值，测 定ATP系列溶液数据。 一18一 訇法4[-定理论与实践研讨奄峙仑文j‘ PMI关系的最佳曲线拟合方程。 2实验结果 2．1 ATP标准曲线 10—4mol／L、5X 当ATP浓度(【ATP])分别为5X 10Bmol／L、5×1012mol／L、5X10。11mol／L时，以相对荧 性方程为y=0．954x+15．88(舻=o．999，P0．001)。 S 富 罾