母体血浆胎儿核酸分析应用于地中海贫血无创性产前诊断.pdfVIP

表1 遗传性球形红细胞增多症的临床分型和脾切除的指征 母体血浆胎儿核酸分析应用于地中海贫血的无创性产前诊断 南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室 严提珍徐湘民 摘要地中海贫血(地贫)是世界上最常见的单基因遗传病之一，通过产前诊断淘汰受累重型患儿 是目前世界上公认的地贫首选预防措施。母血浆胎儿游离核酸的发现为地贫的无创性产前诊断提供了新 的途径。近些年来，针对地贫遗传缺陷(特别是a地贫点突变)的母血浆胎儿游离DNA检测技术，如飞行 时间质谱分析、分子大小分离法、肽核酸介导的突变序列富集方法和数字化PCR等技术的发展使开展地贫 的无创性产前诊断成为现实，这些技术的进一步发展有望推动无创性产前诊断在其他人类单基因病上的 应用。本文在重点阐述与地贫相关的研究外，也对该领域技术发展和应用的整体现状进行了综述。 diagnosis)是现代产科服务的有机组成部分，其内含为在胎儿出生前通过遗传学 产前诊断(prenatal 分析或影像学检测对胎儿的某些特定疾病进行医学诊断。影像学检测主要检测胎儿发育的大体结构是否 有畸形，遗传学检测广泛用于人类遗传性疾病和遗传特性(如性别和血型等)的诊断，后者依据胎儿取 材方法的不同，分为创伤性和无创性诊断两种。无创性产前诊断(noninvasive prenataldiagnosis，NIPD) 是不同于羊膜腔穿刺、绒毛取样和脐血取样等传统创伤性方法的现代技术，主要指母体外周血中胎儿细 freefetalnucleic 胞(fetalcell)和游离胎儿核酸(cell acid，cffNA)采样和分析技术。影像学检测也属无 创性产前诊断的范畴，本文主要介绍遗传学检测中基于母体外周血中胎儿核酸分析的产前诊断。 母体外周血中胎儿细胞(有核红细胞)的发现历史最早可以追朔到19世纪70年代，但直到上世纪60 年代末，Walknowska等在孕妇外周血中鉴定出男胎的滋养层细胞时才首次证实了母体外周血中存在胎儿 redblood cell，NRBC)的研究一直 细胞的事实[1】。此后至今，母体外周血中胎儿有核红细胞(nucleated 是该技术领域关注的重点，但由于母体血液中胎儿细胞的含量极少(占母血细胞的1／109～105)，其分离 和检测技术的复杂性使这一无创性胎儿诊断方法的临床实践和应用受到很大的限制。1997年LoYM等采用 快速煮沸法抽提孕妇血清和血浆中的DNA，并用Y染色体特异性PCR进行胎儿性别诊断，从而首次证明孕 fetal 妇外周血中存在游离胎)LDNA(cell．freeDNA，cftDNA)，这一重要发现开辟了无创性产前诊断的 ·170· (cellfreefetal RNA，cffRNA)的事实，为母体血中胎儿核酸分析技术的广泛应用奠定了研究基础。目前 这一无创性胎儿产前诊断技术已在胎儿性别鉴定、RHD血型分析和非整倍体染色体的诊断等领域得以应 用。由于在cffDNA中检测导致人类遗传病的基因突变十分困难，故其在人类单基因病上的临床应用，特 别是作为常规技术应用尚需假以时日。针对人类单基因病点突变的分子诊断方法学探索是该领域技术应 用的关键，本文将围绕地中海贫血这一代表性人类遗传病的母体血浆(血清)胎儿核酸分析技术的方法 学和无创性胎儿产前诊断在人类遗传病的临床应用前景展开阐述。 1．母血中游离胎儿核酸分子 1．1孕妇血中的胎儿游离DNA 孕妇血循环中cffDNA的来源尚无定论，目前认为主要存在四种机制：①主体源于胎盘滋养细胞，小 部分源于胎儿造血细胞；②胎儿组织在发育过程中自然凋亡，释放出的DNA经母一胎界面进入母血循环 中；⑨胎儿DNA直接从胎儿组织中释放，经母．胎界面进入母血中；④妇血中胎儿细胞通过胎盘屏障渗透 到母体，被母体的免疫系统识别为异物，受到免疫攻击，致使细胞核膜溶解，DNA释放入母血循环中。 Y 1998年Lo 娠第