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二仙汤对去势后大鼠骨质疏松的影响研究 　　[摘要] 目的：研究二仙汤对去势大鼠骨质疏松的影响及机制。方法：将50只SD雌性大鼠随机分为5组，连续给药12周。第6周测尿脱氧吡啶酚（DPD），尿肌酐（U-Cr），U-DPD/Cr。第12周取血清测血钙（S-Ca）、血磷（S-P）、骨钙素（BGP）、I型前胶后羧基端前肽（PICP）、I型胶原交联N末端肽；取股骨测量骨密度（BMD）并行股骨形态学分析。结果：各组S-P无统计学意义。模型组与假手术组比较，DPD，U-Cr，U-DPD/Cr，NTX显著升高， S-Ca，BGP，PICP显著降低，BMD降低；与模型组比较，二仙汤各组和雌激素组DPD，U-Cr，U-DPD/Cr，NTX显著降低，S-Ca，BGP，PICP显著升高，BMD升高。结论：二仙汤可以促进骨形成，抑制骨吸收，维持骨再建过程中骨代谢平衡，提高骨密度，从而起到抗骨质疏松的疗效和骨保护作用。 　　[关键词] 二仙汤；骨质疏松；骨密度；脱氧吡啶酚；I型前胶后羧基端前肽；I胶交联N末端肽 　　[收稿日期] 2014-05-08 　　[通信作者] 王桂敏，TelE-mail163.com 　　[作者简介] 李旭斌，医师，E-mail163.com 　　骨质疏松症（osteoporosis，OP）是一种以低骨量，骨组织的微结构破坏为特征，导致骨骼脆性增加和易骨折的全身性疾病[1]。随着全球人口老龄化，骨质疏松在全世界发病率逐年上升，绝经后妇女发病率更高，其特征是骨量减少，骨组织的显微结构改变，骨折的危险性增大。临床治疗药物主要包括：激素调节药物（雌激素等）、促进骨形成药物（甲状旁腺激素）、促进骨矿化药物（维生素D、钙剂）等。这些药物对治疗OP有效，但伴随有严重副作用，如激素长期治疗出现的血凝状态、高血压、水肿[2]、子宫内膜癌、乳腺癌等[3]。中医药治疗原发性骨质疏松注重于整体调节，调动内因，作用于多个环节，在治疗上有较大优势[4-7]。二仙汤是张伯纳教授20世纪50年代经过反复筛选验证而研制出的一剂名方，该方临床应用几十年，疗效确实，现代研究证明二仙汤可以增加雌激素分泌，增加骨形成和降低骨吸收，从而起到抗骨质疏松的疗效和骨保护作用。本文通过建立去势后大鼠骨质疏松模型，检测生化指标及骨密度等变化，研究二仙汤对去势后大鼠骨质疏松的影响，探讨可能存在的作用机制，为临床治疗绝经后骨质疏松寻求理论依据。 　　1 材料 　　1.1 药品及试剂 二仙汤由辽宁医学院附属第一医院中药局提供。DPD，U-Cr，BGP，PICP，NTX检测试剂盒均购自Sigma公司；10%水合氯醛溶液、4%多聚甲醛溶液购自辽宁医学院科学实验中心；尼尔雌醇购自北京益民药业（批号0904100）。 　　1.2 仪器 LEICA-CM1800石蜡切片机（德国莱卡）；JC303-4电热恒温培养箱（上海嘉和仪器设备厂）；TGLL-18G高速冷冻离心机（太仓市医疗器械厂）；7170A全自动生化分析仪（日本Olympus）；显微镜（MICROPHOT-FXA）；QDR-4500A双能X线骨密度仪（美国HOLOGIC）；550型酶标仪（美国Bio-Rad）。 　　1.3 动物 3个月龄雌性SD大鼠，体重200～220 g，由辽宁医学院科学实验中心提供，动物合格证号LJ08023。 　　2 方法 　　2.1 药物制作 二仙汤由仙茅20 g、淫羊藿20 g、巴戟天15 g、当归15 g、黄柏15 g、知母15 g，沸水煎煮，药液放入浓缩缸内浓缩。其推荐临床剂量为按60 kg人计为每日60 g（生药），折算为大鼠剂量相当于生药6.3 g?kg-1，中药低剂量组每天用药量相当于含生药量6.3 g?kg-1；中药高剂量组含生药量是低剂量组的4倍，相当于含生药量25.12 g?kg-1。按照人与大鼠体表面积比例，以上药物给药容积为1.79 mL，灌胃，每日1次。雌激素组给予1.5 mg?kg-1的尼尔雌醇，用生理盐水稀释成等体积混悬液。 　　2.2 动物分组及模型制做 将50只健康成年SD大鼠，按完全随机数字法分为5组，每组10只：假手术组（Sham组）、模型组（OVX组）、雌激素（EST组）、二仙汤低剂量组（EXD/L组）、二仙汤高剂量组（EXD/H组），将各组大鼠用 10%水合氯醛腹腔注射麻醉（3 mL?kg-1体重），以俯卧姿势固定在手术架上，在季肋，腋中线和脊柱外侧入路暴露双侧卵巢，除假手术组仅暴露外，其余各组均切除双侧卵巢。术后肌注青霉素1万U/只，连用3 d。术后第2天开始行阴道细胞涂片检查，每天1次，连续5 d，阴道上皮角化细胞无周期性变化，证明卵巢去除成功。 　　2.3 给药方