高山草甸土壤放线菌分离方法研究.pdfVIP

第26卷第6期 干 旱 地 区 农 业 研 究 Vo1．26No．6 2008年 11月 AgriculturalResearch intheAridAreas NOV．2008 高山草甸土壤放线菌分离方法研究 盛海彦 ，李松龄2，杨改河3，冯永忠¨，曹广民4 (1．青海大学农牧学院，青海 西宁810003；2．青海大学农林科学院。青海 西宁810003； 3．西北农林科技大学农学院。陕西 杨凌 712100；4．中国科学院西北高原生物研究所 ．青海 西宁 810001) 摘 要 ：采用平板涂抹分离法研究了不同分离培养基及样品预处理对高山草甸土放线菌分离的效果。结果 表明：土样在 120℃干热处理 1h后其悬浮液加0．05％SDS(十二烷基磺酸钠)和6％酵母膏，4O℃振荡30min，能促 进放线茵孢子萌发。增加放线菌的分离数量，并抑制杂菌生长，是高山草甸土放线菌分离时理想的预处理方法。改 良HV琼脂和高氏1号加重铬酸钾(50rag／L)培养基是较好的分离培养基。 关键词 ：高山草甸土；放线菌；分离方法；样 品预处理 中圈分类号 ：S154．38 3 文献标识码：A 文章编号：1000．7601(2008)06．0101。05 放线菌是一类与人类关系非常密切的微生物， 的高山草甸土 0～30cm多点混合样。采样点基本 据统计，在 1000多种抗生素中约有 70％以上是 由 情况见表 1。 放线菌所产生…。放线菌广泛存在于各类土壤 中， 1．1．2 培养基 A．改 良HV琼脂：土壤浸提液 近百年来，人们大约只研究和分离到 10％--20％的 200ml(1：5)、腐殖酸0．5g、琼脂 20g、氯化钾 1．7 土壤放线菌。国内外有关研究单位对放线菌分离方 g、磷酸氢二钠0．5g／L；B．高氏1号培养基；C．甘 法的保密，阻碍着放线菌分离技术的提高。据安德 油精氨酸琼脂；D．察氏琼脂；E．燕麦片琼脂；F．高 荣 J等报道 ，重铬酸钾、放线菌酮对土壤真菌、细菌 氏1号加重铬酸钾 (150mg／L)培养基；G．高氏1 有明显抑制作用，而且可显著提高土壤放线菌的分 号加重铬酸钾(50rag／L)培养基。 离效率；司美茹等 3【]报道 ，链霉素不能用作分离放 1．2 方 法 线菌时的细菌抑制剂，但 120℃千热 1．0h预处理土 1．2．1 培养基的筛选 将 Q一1号、Q一2号、Q一3 样能促进放线菌孢子萌发，增加放线菌的分离数量 弓、Q一4号、Q一5号 自然风干 20d土壤样 品过 2 和种类 ；张学武等 J应用分散和差速离心法对土样 mm筛孔，称取 10g加入盛有 90mL无菌水 (10～ 进行预处理 ，用含有重铬酸钾 (浓度为50mg／L～75 15粒玻璃株)的三角瓶 中，常温振荡 30min，取 l mg／L)的HV琼脂培养基有效地提高稀有放线菌 mL土壤上清液，按梯度稀释至 10 (预备实验表明 的分离效率。在土壤放线菌的分离工作中，由于采 此浓度较适宜观察和计数)，各取 1滴(0．05mL)， 样地点、时间、样品处理、培养基选择和无菌条件等 分别涂布于A、B、C、D、E、F、G七种平板培养基，重 不同，分离效果差异很大。青藏高原是世界第三极，