草鱼肝细胞脂变模型的建立及脂代谢基因表达分析.pdfVIP

中国水产科学 2015年 1月，22(1)：24—32 JournalofFisherySciencesofChina 研究论 文 DoI：1o．3724／SP．J．1118．2015．00212 草鱼肝细胞脂变模型的建立及脂代谢基因表达分析 卢荣华 一，梁旭方 ，孙君君2，杨峰2，王敏 ，李玺洋 ，白小丽 1．华中农业大学 水产学院，湖北 武汉 430070； 2．河南师范大学 水产学院，河南 新乡 453007 摘要：为了筛选草鱼肝细胞脂肪变性的最佳诱导剂及浓度，并初步分析脂肪乳剂 (1ipidemulsions，LE)引起草鱼肝 细胞脂肪变性的作用机理，以草~ (Ctenopharyngodonidellus)正常肝细胞为研究对象，建立草鱼脂肪变性肝细胞模 型，以含 10％胎牛血清的基础培养液为对照组，处理组为含 20％脂肪乳剂 0．5～2mL／L和含 20％、50％胎牛血清的 诱导培养液，孵育草鱼肝细胞 48h后，定量分析肝细胞内的甘油三酯(TG)含量，观察脂滴积聚情况及肝细胞超微 结构的变化，检测细胞培养上清中谷丙转氨酶(alaninetransaminase，ALT)、谷草转氨酶(aspartatetransaminase，AST) 的活性，qRT-PCR技术检测脂代谢关键基因(PPARa、PPARy、SREBP—lc、LPL、Lep和 UCP2)的转录水平变化，蛋 白质印迹技术检测 PPARy、SREBP一1C的蛋白水平变化。结果发现，含 1一一2mL／LLE的诱导液组和含 20％、50％FBS 的诱导液组与对照组相比TG含量均显著上升(尸0．05)，且20％FBS和各浓度 LE诱导组的转氨酶活性与对照组相 比差异不显著(尸0．05)，表明含 1-2mL／LLE的诱导液和含20％FBS的诱导液均可建立草鱼营养性脂肪肝细胞模 型。在肝细胞脂变模型中，PPAR),和 PL等脂代谢基因的表达量显著升高(PO．05)，而 Lep基因表达量显著降低 (P0．05)，PPAR7和 SREBP．1c的蛋白水平升高。结论认为：采用 1～2mL／LLE和20％的FBS均可以在短时间内建 立草鱼肝细胞脂肪变性模型，含 1mL／LLE的诱导液诱导效果最佳；肝细胞内脂质的蓄积可能与脂肪代谢关键基 因PPAR7、SREBP—lc、LPL及Lep等密切相关。 关键词：草鱼；肝细胞；脂肪变性；基 因表达；脂质代谢；细胞模型 中图分类号：$963 文献标志码：A 文章编号：1005—8737一(2015)01—0024—09 肝是机体 内代谢最活跃的器官，在维持能量 目前对于脂肪肝等的研究对象多为实验动物 代谢动态平衡中扮演重要角色。肝也是鱼类脂肪 整体I1]，存在个体差异较大，实验条件不易控制， 合成的主要场所，约 占脂肪合成的 90％以上。近 影响因素多等不利因素。而脂肪肝细胞模型的研究 年来在水产动物养殖中，尤其是中国特有且产量 则主要在N-$L动物中进行L1’6-7]。在鱼类，有研究 最大的草鱼养殖，已普遍采用投喂配合饲料的精 显示在青鲻 (Oryziaslatipes)上 已建立肝脂肪变性 养模式，虽然显著提高了草鱼的生长速度，但 由 模型，并以这个模型发现了一些有效的治疗药物 于配方技术尚未完善，糖脂含量过高或比例失调， 等 ，引。迄今为止，在细胞水平上采用肝细胞脂变 常常造成草鱼腹腔脂肪组织过度蓄积及肝脂肪代 模型来研究鱼类脂代谢紊乱过程及其机理的研究 谢紊乱等症状，使肉品质下降，高温季节甚至出 还非常少见。因此本研究模拟非酒精性脂肪肝发病 现大量死亡，已成为严重困扰我国草鱼养殖业持 过程，结合一些常规检测指标，即TG含量、脂滴 续健康发展的难题之一。 数量以及 ALT、AST量，建立体外草鱼脂肪肝细胞 收稿 日期 ：2014—05．10；修订 日期：2014—0810． 基金项 目：国家 自然科学基金项 目31402311)；河南省基础与前沿技术研究计划项 目(142300410158)． 作者简介：卢荣华(1977一)，博士，硕士生导师，主要研究方向为鱼类糖脂代谢调控机理研究．E—mail：laoaiyika@hotmai