荧光标记-高效液相色谱测定多肽（PC2～PC6）的研究.pdfVIP

第34卷 ，第12期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 VoL34，No．12，pp3301—3306 2014年 12月 SpectroscopyandSDectralAnalysis December，2014 荧光标记一高效液相色谱测定多肽 (PC2～PC6)的研究 李景喜 。，高丽洁 ，曹 为 ，郑 立 ，陈军辉 ，徐秀丽 ，王小如 1．国家海洋局第一海洋研究所海洋生态研究中心，山东 青岛 266061 2．中国地质大学(北京)海洋学院，北京 100083 3．中国海洋大学化学化工学院，山东青岛 266100 摘 要 基于多肽 (PolypeptidesPC2～PG)中富有巯基 (一SH)官能团，其与单溴二胺 (Monobromobimanes mBBr)能够发生缩合反应，生成具有荧光信号的多肽衍生物；通过优化色谱分离条件 ，建立了高效液相色谱 (荧光检测器)测定多肽的方法 ；试验中利用质谱鉴定了PCs与mBHr缩合反应的比例关系。结果显示，通过 比较PCs标记前后化合物的质谱图，PCs与mBBr反应比例关系为 1：1，稳定性好；高效液相色谱一荧光法 测定多肽化合物，五种化合物问分离度较好，出峰时间集中在 16．6～22．0min间；PCz，PC。，PC4，PCs和 PCs线性相关性系数O．9991，方法定量限分别为0．3，0．05，0．3，0．5和 0．8mg·L ，回收率范围为 83．0 ～1O2．0 ；重线性较好，RSD(2．0 ，该方法实现了多肽类化合物快速、准确定量分析。 关键词 多肽；荧光标记；高效液相色谱 ；质谱表征 中图分类号：0657．3 文献标识码：A DOI：10．3964~．issn．1000—0593{2014)12—3301～06 段的体内络合。生物吸附具有饱和效应，当重金属离子进入 引 言 细胞后 ，谷胱甘肽、多肽及金属硫蛋白等都能与游离的重金 属离子配位络合 ，其中多肽的络合能力最强[g。l；络合物被 植物络合素(PhytochelatinsPCs)(简称多肽)是由半胱氨 排出细胞或储存在液泡内，以降低重金属对藻体的毒害 。 酸、谷氨酸和甘氨酸组成的多肽，多肽分子量范围为 2～4 自从 Kondo等 1【z]首次在裂殖酵母 (Schizosaccharomyces KD，一般化学式为 (7-Glu-Cys)—Gly(一2～11，常为2～ pombe)中发现 PCs，对PCs的分析测定方法的研究得到了不 4)。PCs是特殊的金属巯蛋 白，广泛分布于植物体 内，但 断的发展。据近年来的文献报道_114]，测定PCs的方法主要 PCs不是结构基因的直接产物 ，是在重金属离子刺激下，以 包括高效液相色谱法、质谱法、电化学法、电泳法等u ]， GSH为底物合成的酶促产物[1]。合成后的PCs能通过丰富 但是多数集中在定性分析 ，快速、准确的定量测定海藻中多 的巯基 (一SH)结合进入细胞 内的游离金属离子，降低细胞内 肽的研究报道甚少。基于多肽PC2～PC6中富有巯基 (一sH) 可扩散的金属离子浓度 ，起到降低重金属毒性作用，从而增 官能团，利用mBBr荧光标记，反应生成具有荧光特性衍生 强植物抵抗重金属胁迫的能力_3“]。目前对陆地植物中多肽 物 ，并采用 HPIJTrap_MS首先对标记物的反应比例进行 的研究报道较为多见_5]，对以海洋植物为实验材料的研究 表征，通过优化色谱条件 ，荧光检测器以激发波长 380nm， 较少，然而，多肽在海洋环境