高效液相色谱法测定截短侧耳素的含量.pdfVIP

亿 亏与生 物 Z程 2014，VoI．31No．10 分析潮i式图 Chemistry Bioengineering doi：10．3969／j．issn．1672—5425．2014．10．018 高效液相色谱法测定截短侧耳素的含量 张 婷 。金 鑫 ，李 倩 ，涂小进 (1．武汉软件工程职业 学院，湖北 武汉 430205；2．华 中农业大学，湖北 武汉 430O70) 摘 要 ：建立 了截短侧耳素含量的HPLC检测方法。采用 AgilentZorbaxC18色谱柱 (250mm×4．6mm，5 m)，流 动相为 CH3CN一0．02mol·L_。KH2PO4缓冲溶液(50：50，体积 比)，流速 1．0mL ·min_。，检测波长 205nm，进样量 2O L，柱温 25℃。结果表 明，截短侧耳素浓度在 0．12～2400 g ·mL 范围内与峰面积线性关系良好 (R=0．9998)，平均 回收率为 98．7％，检 出限为 2．24ng，定量限为 6．84ng。该法简便、准确、专属性好 。 关键词 ：截短侧耳素 ；高效液相色谱 ；含量 中图分类号：O657．72 文献标识码 ：A 文章编号：1672—5425(2014)10—0069—02 截短侧耳素 (pleuromutilin)是高等真菌担子菌纲 稀释至刻度。 俱4耳 属 Pleurotsmutilus和 Pleurots nssPcZ：rn s 1．2．2 系统适应性溶液的配制 菌种经深层培养产生的一种抗生素 ，属双萜类化合物。 精密量取 1mL截短侧耳素标准 品溶液 ，置于 100 已上市 的截短侧耳素衍生物泰妙菌素 (tiamulin)和沃 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度 。 尼妙林 (valnemulin)被广泛用作兽药 ，2007年 由英 国 1．2．3 色谱条件 葛兰素史克研发的另一种衍生物瑞他莫林(retapamu- 色谱柱 为 AgilentZorbaxC18(250mm ×4．6 lin)通过美国FDA和欧盟批准，是第一个人类使用的 mm，5 m)，流 动 相 为 CH3CN-0．02otol ·L-1 局部外用截短侧耳素类抗生素[1]。作为半合成起始原 KH2PO 缓冲溶液(5O：50，体积比)，流速 1．0mL · 料的截短侧耳素将会有很好的市场 。在截短侧耳素研 min一 ，检测波长 205am，进样量2O L，柱温25℃。 制过程中，需要对其和杂质含量建立一种快速、准确的 分析方法 。鉴于此，作者采用 HPLC法对截短侧耳素 2 结果与讨论 和杂质的含量进行分析测定。 2．1 检测波长的选择 1 实验 取截短侧耳素标准品适量 ，配制成浓度为 20 g ·mI 的溶液，扫描紫外吸收光谱。结果发现 ，截短 1．1 试剂与仪器 侧耳索在 205nm处有最大吸收，故选择检测波长为 截短侧耳素供试品，湖北健源化工有限公司；截短 205nm 。 侧耳素标准品，Sigma公司；乙腈，色谱纯；KHzPO ， 2．2 流动相的选择 分析纯。 1)实 验 发 现，选 用 CH。CN～0．02mol ·L Agilent1260型高效液相色谱仪，安捷伦科技公 KH PO 缓冲溶液作为流动相的分离效果与CH。CN一 司；UV一1801型紫外可见分光光度计 ，北京瑞利分析