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微流控芯片实验室进展 基于微流控芯片电泳的糖和蛋白质分子相互作用方法研究 刘晓君戴忠鹏秦建华4林炳承+ 中国科学院大连化学物理研究所116023 1引言 糖和蛋白质相互作用研究是生命科学领域中一个非常重要的分支。微流控芯片电泳在分 子相互作用方面的研究已经显示出了其他技术无法比拟的诸多优势，如分析速度快、消耗少、 分析通量高、操作模式灵活等。不过，尚存在一些问题，如重复性、检测方式等[1，2】。作 者在微流控芯片平台上建立了前沿分析、亲和电泳、亲和色谱法来研究糖和蛋白质分子相互 作用。 2实验和结果 2．1双进样通道前沿分析法 图1．双进样通道微流控芯片操作示意图 1112．用于测量肝素和血清白蛋白结合常数的典型前沿分析电泳图 A，进样过程：B分离过程 在图1所示芯片上，以罗丹明B作为标准样品来校正血清白蛋白的峰高。罗丹明B与 肝素和血清白蛋白的混合物从各自的进样通道，同时过量进样、分离形成平台峰。血清 白蛋白平台峰的高度代表了其在最初混合物中的游离浓度(图2)。在此基础上，测得了 肝素和血清白蛋白分子相互作用，所得的测量值与文献值基本符合【3】。 2．2以间接检测为基础芯片亲和电泳方法 在常规十字架芯片上，以荧光素钠为荧光探针指示目标分析物，以二次水来监测电渗流 变化，以肝素为添加剂，以血清白蛋白为样品进行电泳操作。根据缓冲液中肝素浓度变化和 血清白蛋白相应电泳淌度的变化，表征了它们之间的相互作用(图3)。实验得到的结合常数 值与在紫外可见检测方式下的测量值吻合【4】。 图3．血清白蛋白(2．0ml／mL)在肝素浓度逐渐增加的缓冲液中的 芯片电泳图’ (a)O州．(b)3∞叫，(c)5∞州．(d)700IJ-A．(e)900州．if) 167un lC00州．(g)1 ‘通讯联系人：林炳承bclin@dicp．ac．cn秦建华jhqin@dicp．ac．cn 基金项目：国家自然科学基金项目，国家自然科学基金项目 芯片应用 在微通道内构建了长为六百微米的肝素亲和柱(如图4)。在电渗流驱动下，粒细胞集 落刺激因子(G-CSF)流经肝素亲和柱，与肝素反应而被吸附直至亲和柱饱和。用等梯度硫酸 多糖溶液进行特异性洗脱，测出其洗脱浓度。利用硫酸多糖的洗脱浓度和其与G-CSF结合常 数的线性关系(图5)，表征其它有G-CSF参与的相互作用体系。 图4．集成亲和整体柱的微流控芯片示意图 图5．硫酸多塘的洗脱浓度及其同G-CSF结合常数的Ⅳ关系 3结论 以硫酸多糖和蛋白为模型体系，在微流控芯片平台上建立了前沿分析、亲和电泳、亲和 色谱法来研究分子相互作用。 参考文献 CI]chi明。N．H．，Harrison，D．J．，Electrophoresis1998．鹧3040-3044． [2] of A Stettler，A．R．。Schwarz，乩九，JournalChromatography2005。]063,217—225． of [3]Longas乩o．，F．霄．S．，FinlayT．H．，ArchivesBiochemistryandBiophysics1980。200,595-602． [4]Hattori，T．，Kinura，K．，Seyrek，E．，Dubin，P．L．，Analytical2001．295,158—167． Biochemistry