Tet-off%2fTet-on系统在骨质疏松症基因靶向治疗中应用.pdfVIP

Tet-off/Tet-on 系统在骨质疏松症基因靶向治疗中的应用 温家宾 综述 沈彬* 审校 （四川大学华西医院骨科，成都610041） 摘要：骨质疏松症是一种受遗传因素高度影响的全身性骨代谢性疾病。骨质疏松症的基 因治疗研究正逐渐兴起，但非调控性的基因治疗具有一定的风险，所以，如何对目的基 因的表达进行分子水平的调控，以及如何提高治疗的靶向性，使效果仅作用于骨组织而 不引发非骨组织或器官的毒副作用，成为了目前研究的重点。Tet-off/Tet-on 系统作为 目前应用最广泛的调控系统，不但能够有效控制基因表达，同时其诱导剂四环素及其衍 生物与骨组织具有高度的亲和性，具有骨靶向性。本文通过文献复习，综述了 Tet- off/Tet-on 系统在骨质疏松症基因靶向治疗中的应用，认为 Tet-off/Tet-on 系统在骨 质疏松症的基因靶向治疗方面具有良好的调控作用，是骨质疏松症基因治疗、靶向治疗 的理想工具。 关键词：Tet-off/Tet-on 骨质疏松症 基因治疗 靶向 随着分子生物学的不断发展，骨质疏松症 （osteoporosis, OP）的发病机理从基因 分子水平被揭示。人们尝试用基因治疗的方法来更加有针对性、精确性地治疗这些疾病， 即将目的基因通过一定方式导入适当的靶细胞，使目的基因的产物改善靶细胞的基因缺 [1] 陷，使靶细胞获得新的生物学功能和行为 。目前，骨质疏松的基因治疗研究正逐渐兴 起，但是这种非调控性的基因表达却具有一定的风险，例如可能导致细胞过度生长甚至 是肿瘤的发生[2][3]。如何使目的基因能在靶细胞内适时、适量的表达成了目前骨质疏松 症基因靶向治疗无法回避的问题。选择与构建一个安全、高效、可调控的甚至是具有骨 组织特异性的靶向基因载体是改善骨质疏松症基因靶向治疗的重要途径，这一技术可通 过利用诱导剂去调控目的基因上游启动子加以实现。目前，一些基因表达调控系统已经 用于实践，如 Tet-off/Tet-on 调控系统和类固醇激素调控系统等，其中应用最为广泛 [4] 的是 Tet-off/Tet-on 。下面将对 Tet-off/Tet-on 调控系统在骨质疏松症基因靶向治 疗中的应用做一综述。 1 Tet-off/Tet-on 基因表达调控系统研究进展 Tet-off/Tet-on 调控系统是由 Gossen 和 Bujard 于 1992 建立在 E. coli 的 Tn10 [5] 四环素抗性操纵子基础之上的真核细胞基因表达系统 。它分为 Tet-off 及 Tet-on 两 种系统,都是靠四环素（tetracycline，Tet）及其衍生物强力霉素（doxycycline，Dox） 来驱动目的基因转录关闭或者转录开启。 1.1 Tet-off/Tet-on 调控系统的分子组成 该系统由 Tet 反应性元件 TRE(tetracycline responsive element)及两种 Tet 调 节 蛋 白 tTA(tet controlled transcriptional activator) 和 rtTA( reverse tetcontrolled transcriptional activator)组成。 作者简介：温家宾，研究方向：关节外科，（电话（电子信箱） wjb2011cd @163.com *通讯作者：沈彬 华西医院骨科副主任、关节外科学组组长（电话 （电子信箱）shenbin71@ TRE 由有7 个拷贝的细菌四环素操纵子序列 (Tet operator DNA sequence, TetO)插入 到最小巨 细胞病毒启动子上游组成。Tet-off 调控组分 tTA 是由大肠杆菌的四环素阻遏蛋白( Tet repressor protein, TetR) 和人类单纯疱疹病毒（herpesvirus，HSV）的病毒蛋白VP16 的 C-末端具有转录激活作用的区域构成的融合蛋白，其中 TetR 介导 tTA 与 TetO 的结 合，VP16 则具有转录激活作用。Tet-on 调控组分（reverse tet controlled