高致病性传统型PRRSV鉴别诊断间接ELISA方法的建立及初步应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 的建立及初步应用 肖一红-，吕军华1，聂力1，马晓春1，周恩民P 【l，山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018；2．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100) 摘 Nsp2上有不连续的30个氨基酸的缺失，其中29氨基酸是连续的。为建立一种基于血清学水平上高致病性与传 此抗体对表达的蛋白进行ELISA和western 和优化，确定了临界值，并对604份血清进行了检测和应用。重组抗原得到高效表达，分别命名为D29、D15； 优化的ELISA条件为：碳酸盐作为包被缓冲液，D29、D15均包被200ng／孔，10％小牛血清封闭，在被检测血 化试剂盒检测阳性，而以D29、D15均为阴性的血清有17份。至此我们已经成功的建立了高致病性与传统型 PRRSV的鉴别诊断方法。 关键词：PRRSV；缺失序列；鉴别诊断；ELISA and 生活水平。 猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductive nnl PRRSV病毒粒子呈球形、有囊膜，直径为45 respiratorysyndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV) ～80 感染所致的一种急性传染病。该病于1987年在美国 nln。其基因组为单股、正链、不分节段RNA， 的北卡罗纳、衣阿华等州的猪群中首次暴发。到目 长约15．4 kb，含有9个相互重叠的开放读码框，从 前为止，几乎世界各国均有此病的暴发和流行。虽 然世界动物卫生组织将其列为B类传染病，但近年 来该病给养猪业带来的巨大经济损失已经远远超过 的RNA复制酶和聚合酶，占基因组全长的80％。 了某些A类传染病。PRRS以繁殖障碍、呼吸系统 kb，是 非结构蛋白Nsp2位于ORFla内，长约3 疾病等为主要特征，主要引起母猪流产，产死胎、 PRRSV基因组中变异性最高的一个基因，是病毒分 弱仔等临床症状。PRRSV于1996年在我国首次报 类的依据。Nsp2具有半胱氨酸蛋白酶活性，具有切 道fJ】，在这短短的十几年里，PRRSV几乎流行于全割蛋白的功能，它在不同的分离株中常有氨基酸缺 国各个猪场。特别是在2006年～2007年间，突变失，是造成毒株长度不同的主要原因㈣。目前已经 的PRRSV引起在我国南方一些省份猪场暴发“高明确，在2006年暴发的“高热病”中起重要作用的 热”综合征【矧，使我国的养猪业遭到了巨大的影 响，以至于猪肉价格居高不下，严重影响着人们的 其中29个氨基酸是连续的。要实现对PRRS的控制 101 基金项目：山东省自主创新成果转化重大专项项目(2008ZHZXlAl1 作者简介：肖一红(1976～)，女，山东泰安人，讲师，主要从事免疫生物学研究． ’通信作者：E-mail：zhouem@nwsuaf．edu．cn —157— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 端15个氨基酸的45 首先要对感染毒株的类型进行确定，再实施相应的