小檗碱与育亨宾对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的影响及其机制研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(12)：2206-2212 [文章编号] 1000-4718(2014)12—2206—07 小檗碱与育亨宾对脓毒症小鼠脾 细胞凋亡的影响及其机制研究术 贾宝银 ， 杨多猛， 王 媛， 李红梅， 余小慧， 吕秀秀， 陆大祥， 王华东 (暨南大学医学院病理生理学系，国家中医药管理局三级科研实验室 ，广东 广州510632) [摘 要] 目的：探讨小檗碱与育亨宾对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 ：采用盲肠结扎 穿孔(CLP)构建小鼠脓毒症模型，分为假手术(sham)组、CLP组、CLP+小檗碱组、CLP+育亨宾组、CLP+小檗碱与 育亨宾合剂组。CLP术后2h灌胃给予相应药物 ，20h后取脾脏，用TUNEL和流式细胞术检测小鼠脾细胞凋亡，酶 荧光法检测 caspase．3、caspase．8和caspase-9的活性变化，Westernblotting检测凋亡相关蛋白Fas、Bim、Bcl-2和Bax 的表达。结果：(1)CLP组脾脏TUNEL阳性细胞百分率显著高于 sham组(P0．05)，CLP+育亨宾与小檗碱合剂 组、CLP+育亨宾组凋亡细胞百分率显著低于CLP组(P0．05)。(2)流式细胞仪检测显示CLP组凋亡的脾细胞 及T淋巴细胞明显多于 sham组 (P0．05)，CLP+育亨宾与小檗碱合剂组 、CLP+育亨宾组凋亡的脾细胞及 T淋巴 细胞明显少于CLP组 (P0．05)。(3)CLP+育亨宾与小檗碱合剂组、CLP+育亨宾组脾细胞 caspase一3、caspase一 8、caspase-9的活性均低于CLP组 (P0．05)；而 CLP+小檗碱组脾细胞caspase-9活性也低于 CLP组 (P0．05)。 (4)CLP+育亨宾与小檗碱合剂组胞浆 F．as、Bim、Bax表达均低于 CLP组 ，CLP+育亨宾组胞浆 Fas表达低于 CLP 组，CLP+小檗碱治疗组胞浆Bim、线粒体Bax表达均低于CLP组。结论：(1)小檗碱与育亨宾合用可通过阻断内、 外源性凋亡途径抑制脓毒症小鼠脾细胞凋亡，特别是T淋巴细胞凋亡。(2)育亨宾主要通过抑制Fas的表达、进而 阻断内、外源性凋亡途径减少脓毒症诱导的脾细胞凋亡。(3)小檗碱可抑制脓毒症小鼠脾细胞线粒体凋亡途径， 但对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的抑制作用并不明显。 [关键词] 小檗碱；育亨宾；细胞凋亡；脓毒症 ；脾淋巴细胞 [中图分类号] R285．5；R163 ．2 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2014．12．016 Effectsofberberineandyohimbineonsplenocyteapoptosisinsepticmice JIABao-yin，YANGDuo—meng，WANGYuan，LIHong—mei，YUXiao-hui，LUXiu—xiu， LU Da．xiang．WANG Hua．dong (DepartmentofPathophysiology，SchoolofMedicine，JinanUniversity，KeyLaboratoryofPathophysiology，StateAdminis— trationofzTrⅡd MZChineseMedciineofThePeople’sRepublciofChina，Guangzhou510632，China．E-mail：owanghd@ jnu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Toobservetheeffectsofberberineandyohimbineonsplenocyteapoptosisinsepticmiceand underlyingmechanisms．METHODS：Themiceweresubjectedtocecalligatureandpuncture(CLP)．Thedrugsorvehi- clewere Venintragastrically2hafterthesu