pAD-TGFβ1对骨组织工程种子细胞转归转基因保护.pdfVIP

第二届泛长江流域骨科新进展研讨会·论文汇编 上海·2008 两组比较均尸0．05 3讨论 关节软骨缺损的修复一直是I临床上亟待解决的重大难题，因为成熟的关节软骨修复能力 相当有限，直径大于4mm者的缺损一般不能自行修复。为此，许多学者进行了有益的探讨。 有学者尝试用自体软骨移植修复关节软骨取得满意的近远期效果，但自体软骨来源有限，且 对供区的结构功能有影响，同种异体骨软骨移植材料获得相对较易，大小形状不受限制，且 具有生物活性与受体部分能发生生物愈合，同时保留肌肉、韧带及关节囊的附着点，为重建 关节和肢体功能提供了条件，因此应用前景较为广阔。新鲜同种异体骨软骨移植取得了一定 的临床效果，但它仍存在免疫排斥、疾病传播、移植骨软骨被吸收、关节不稳定、软骨塌陷 等并发症，早、中期疗效满意、而远期则有不同程度的退变。因此，本研究应用冷冻骨软骨 移植来修复兔的关节软骨巨大缺损，旨在探讨冷冻同种异体骨软骨移植修复大面积关节软骨 缺损的可行性，为以后研究半髁移植治疗关节软骨缺损提供理论和实验依据。 同种异体骨软骨移植成功的关键问题是如何降低免疫排斥反应。关节软骨是一种覆盖在 滑膜关节表面的光滑、富有弹性、高渗透性的软骨组织，属于透明软骨，对维持关节的生理 功能具有非常重要的作用。成熟关节软骨组织内无血管、神经和淋巴管，滑液通过软骨表面 的渗透是关节软骨主要的营养来源。关节软骨主要由软骨细胞和细胞外基质组成，软骨基质 蛋白多糖中的核心蛋白具有抗原性，但被其肽链上无抗原性的酸性糖胺多糖所覆盖，使软骨 成为弱抗原性组织，有利于异体骨软骨移植物的存活。 近年来，低温保护剂的应用及程序冷冻技术的不断发展为同种异体骨软骨移植的成功创 造了有利的条件。国外学者研究证明，用二甲基亚砜预处理后，程序深低温保存的异体骨软 骨移植可显著降低移植物的免疫排斥反应，提高免疫耐受，降低白细胞的免疫原性，并且对 异体骨软骨移植物的形态学、组织学及生物力学影响小，可保证远期移植效果。骨软骨移植 物所带软骨下骨的厚度也有限制，一般认为软骨下骨的厚度以3～5mm为宜，过薄不利于 固定，导致关节不稳，过厚的松质骨则会产生较火的排斥反应。本实验中所截取的松质骨厚 度约为4ram，移植时尽量选用大小、形状匹配的骨软骨块，用两枚克氏针牢固固定，保持 关节面平整。 本实验应用低温保护剂的程序深低温冷冻的方法制备的兔胫骨内侧髁骨软骨移植物修 复兔大面积关节软骨缺损。结果发现，实验组和对照组术后12周在关节软骨的大体标本、 X线摄片、组织学检查、软骨缺损修复的Wakitaniscore评分结果、免疫组织化学检查等方 面均无明显差异。实验结果表明，使用低温保护剂的程序深低温冻存同种异体骨软骨移植后 可完全修复大面积关节软骨缺损，并与自体骨软骨块修复兔的关节软骨缺损效果相近。而且， 与新鲜异体骨软骨移植相比较，冷冻移植可择期完成关节重建手术，并有充裕的时间进行各 项检查，防止供体可能带来的病毒或细菌感染。因此，本实验为冷冻骨软骨半髁移植进一步 应用于临床修复关节软骨缺损提供了有力的实验和理论依据。 pAD-TGFpI对骨组织工程种子细胞转归晌转摹因保护 易诚青曹云王秋根马春辉高堪达周孜辉左斌张磊 上海交通大学附属第一人民医院骨科，上海，200080 I摘要】目的探讨pAD-TGFpI基因转染对骨组织丁：程种子细胞MSCs体外转归的转基因保 213 第二届泛长江流域骨科新进展研讨会·论文汇编 上海·2008 护价值。方法采用荧光显微镜下观察转染细胞的GFP表达，MTT法检测细胞的增殖情况， TUNEL法检测细胞的凋亡指数。结果荧光显微镜下证实质粒pAD．TGFIBl确切表达于 MSCs，并显著提高细胞增殖率，降低细胞凋亡指数。结论通过pAD．TGFIBl转基因修饰种 子细胞MSCs，可有效标记MSCs，并明显改善MSCs转归。 基因转染； 种子细胞 【关键词l转化生长因子pl： 作为实现修复重建的功能主体，种子细胞的活力和去向和直接决定了骨组织工程的效 能。近年来，种子细胞活性的诱导与优化研究已取得瞩目的成绩，然而对其转归行为，仍缺 乏深入认识与有效干预。为此，我们应用pAD．TGFIBi转基因修饰种子细胞MSCs(骨髓基 质干细胞)，观察MSCs转