银杏1-羟基-2-甲基-2-（E）-丁烯基-4-焦磷酸还原酶基因（hdr）转化银杏的研究.pdfVIP

第47卷 第5期 复 旦学 报 (自然科学版) Vo1．47No．5 2008年 10月 JournalofFudanUniversity(NaturalScience) Oct．2008 文章编号：0427—7104(2008)05—0598—06 银杏 1-羟基-2·甲基-2·(E)·丁烯基一4-焦磷酸 还原酶基因(hdr)转化银杏的研究 张 雯 ，王玉亮2，林 娟 ，陆 洁 ，孙小芬 ，唐克轩 (1．复旦大学 生命科学学院遗传512程国家重点实验室，上海200433； 2．上海交通大学 农业与生物学院 植物生物技术研究中心，上海 200240) 摘 要：采用根癌农杆菌介导法，将来源于银杏(GinkgobilobaL．)的 l一羟基一2一甲基一2一(E)一丁烯基一4焦磷酸还 原酶(1-hydroxy一2一methyl一2一(E)一butenyl一4diphosphatereductase，Fn)R)基因(Gbhdr)转化银杏种子胚．通过潮霉 素(10rag／L)筛选，获得了8个抗性愈伤组织系，PCR检测表明其中有 7个为转基因愈伤组织系．采用 LC_ ELSD法对其中4个独立转化系中的银杏总内酯含量进行了测定，结果显示转化系 h-8中银杏总内酯含量相比 非转基因系大幅提高，达到非转基因系的2．5倍．RT—PCR结果显示该4个转化系中Gbhdr的表达量相比非转 基因对照都有不同程度地提高． 关键词：1-羟基一2一甲基一2一(E)一丁烯基一4一焦磷酸还原酶基因；愈伤组织；农杆菌介导法 ；银杏 中图分类号：Q37 文献标识码 ：A 银杏(GinkgobilobaL．)是一种珍贵的药用植物．银杏叶中具有药理作用和治疗效果的成分主要为黄 酮类和萜类化合物，后者包括二萜类化合物银杏内酯和倍半萜类化合物白果内酯 ．活性测试结果表明， 银杏内酯具有显著的PAF(PlateletActivatingFactor)拮抗作用，被公认为是治疗气管炎、哮喘、内毒素休 克、器官免疫排斥反应等多种炎症疾病的新型治疗剂_2J．白果内酯具有 良好的神经保护作用，对人体卡氏 肺囊虫有抑制作用和抗水肿作用_3J．由于银杏内酯在天然植物中含量很低(0．001％～0．O1％)[，面对不 断扩大的银杏制品的市场需求和有限的银杏树资源，用基因工程技术修饰银杏萜内酯生物合成途径已成 为提高银杏萜内酯含量最具潜力的方法之一． 所有的天然萜类，包括二萜烯类物质银杏内酯在内，都来 自于两个基本的五碳通用前体：异戊烯基焦 磷酸(IPP)和二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)_l56j．植物可以利用两条截然不同的途径来合成萜类：一条是 经典的MVA途径，位于细胞质，一般主要合成固醇、倍半萜和三萜等化合物_l7；另一条是MEP／DXP途 径，位于质体，主要合成半萜 、单萜、二萜及四萜类化合物l88_．银杏内酯在结构上是二萜类化合物，因此被 认为其前体 IPP／DMAPP主要是由MEP途径提供． 1一羟基一2一甲基一2一(E)一丁烯基一4一焦磷酸还原酶(卜hydroxy一2一methyl一2一(E)一butenyl一4一diphosphatere— ductase，rDR)是MEP途径中最末端的酶，以5：1的比例同时把 1一羟基一2一甲基一2一(E)一丁烯基一4一焦磷酸 (啪 PP)转化成IPP和DMAPP的混合物[9,10J．通过在大肠杆菌中超表达蓝细菌和植物中的M／r基因证 明了HDR是萜类生物合成的限速酶_ll¨．BotellaP·avia等人比较了脱氧木酮糖一5一磷酸合酶(DXS)和HDR 在萜类生物合成中的贡献度．他们在拟南芥里先转入了紫杉二烯合成酶基因(ts)，使拟南芥能产生紫杉醇 的前体物质紫杉二烯，再分别转入dxs和hdr基因，结果证明转人 hdr基因是转入 dxs基因产生的紫杉 醇含量的两倍，证明了HDR在通过MEP途径提供前体的萜类的生物合成中的主要控制作用l1．为了了 收稿 日期：2008—04—09 基金项目：上海市科学技术委员会上海市优秀学科带头人资助项 目和上海市领军人才资助项 目(04XD14011) 作者简介：张 雯(1982一)，女，硕士研究生；通讯联系人唐克轩，男，教授，E—mail：kxtan