冰醋酸在调节HE染色中的作用.pdfVIP

· 670 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2011Jun；27(6) 石蜡切片免疫荧光染色在肾活检病理诊断中的 应用 张 岚 ，王水华。，陈邦明 ，吴 彬 ，陈和娟 关键词：肾脏；活组织穿刺检查；石蜡包埋；免疫荧光染色 中IgA肾病4例、狼疮性肾炎3例、膜性肾病 3例、系膜增生 中图分类号：R446．6 文献标识码：B 性肾小球肾炎(MsPGN)3例 、肾小球轻微病变 (MAG)2例。 文章编号：1001—7399(2011)06—0670—02 所有标本均进行冷冻切片和石蜡切片免疫荧光染色。制作 石蜡切片的组织用 10％中性福尔马林于4℃冰箱 固定 12 在肾脏的病理诊断中，肾穿刺组织必须进行冷冻切片免 h，常规脱水、浸蜡、包埋 、切片。但浸蜡时间不宜超过4h，温 疫荧光染色 l2J、石蜡切片HE、Masson、PAS、PASM染色和电 度严格控制在55—60℃，FITC标记的兔抗人 IgG、IgM、IgA、 镜检查等 ，以达到正确的诊断。光镜观察时须有 10个以上 c3、C4、Clq、FRA均为北京中杉公司试剂。 的肾小球才能作出客观的诊断 。在肾脏的病理诊断中， 1．2 方法 (1)固定 ：10％中性福尔马林 4℃固定 12h以 冷冻切片免疫荧光染色具有不可或缺的作用 ，但有时各种原 上；(2)包埋 ：85％～100％梯度乙醇脱水 ，每步 1O～15min， 因导致所取的肾小球数 目不够或基层单位无冷冻切片设备 二甲苯透明20rain，60℃浸蜡2h进行石蜡包埋；(3)切片： 等因素均给诊断带来困难。因此，我们通过对肾活检组织石 先用(APES)对载玻片行防脱片处理，切片3LLm厚，置45℃ 蜡切片进行免疫荧光染色，取得了较好的效果，现介绍如下。 水浴展片，置烤片机60℃以下烤片40rain；(4)脱蜡至水 ：二 甲苯脱蜡 ，80％～100％梯度 乙醇至水，每步 1—2min，0．叭 1 材料与方法 mol／LpH7．2～7．4磷酸盐缓冲液 (PBS)浸泡3rain×3次； 1．1 材料 选用九江市中医院病理科肾活检标本 15例，其 (5)阻断内源性过氧化物酶的活性：3％H：O5min；(6)修复 抗原 ：滴加 0．4％、PH2的胃蛋白酶，湿盒内37℃孵育 l0 收稿 日期：2010—12—21 min；(7)0、01mol／LpH7．2～7．4磷酸盐缓冲液 (PBS)浸泡 作者单位：江西省九江市中医医院 病理科、肾内科，九江 332000 3rain×3次；(8)无关动物血清封闭，室温下20rain，倾去血 作者简介：张 岚，女，主治医师。E—mail：yuyizhixia5711@sina．corn 清，勿洗；(9)直接免疫荧光染色，滴加硫氢酸荧光素 (FITC) 王水华，男，主任医师，通讯作者 标记抗体包括 ：IgA、IgG、IgM、C3、C4、C1q及纤维蛋白相关抗 的亲和力减弱 ，此时仍用改良Gill苏木精染核则核的着色不 3 讨论 良，胞质染色时伊红也难着色，即使延长苏木精和伊红的染 2010年前，我们均使用普通 10％福尔马林固定标本，改 色时间效果仍然不佳 ，切片的肉眼及镜下观均像有一层雾状 良的Gill苏木精染色细胞效果佳。为了分子病理学技术的 物遮盖一样 ，不透明。所以我们在使用 10％中性福尔马林 开展，现改用 10％中性福尔马林固定标本后，由于 10％中性 固定组织后就把原来的改 良Gill苏木精中的冰醋酸的量增 福尔马林的pH值为7，穿透力没有普通 10％福尔马林强，固 加了，也就是