剑豆SRAP-PCR反应体系的建立及优化.pdfVIP

华南农业大学学报 2015，36(1)：75．78 http： xuebao．scau．edu．ell JournalofSouthChinaAgriculturalUniversity doi：10．7671／j．issn．1OOt一411X．2015．01．014 刘明骞，陈丽君，欧阳昆唏，等．剑豆 SRAP-PCR反应体系的建立及优化 [J]．华南农业大学学报，2015，36(1)：75—78 剑豆 SRAPP·CR反应体系的建立及优化 刘明骞 ，陈丽君 ，欧阳昆唏 ，丁美美 ，陈晓阳 (1华南农业大学林学院／广东省森林植物种质创新与利用重点实验室，广东广州510642； 2华南农业大学教学科研基地管理中心，广东 广州510642) 摘要：【目的】建立和优化剑豆Canavaliaerl$fiormis的SRAP—PCR体系，为分析剑豆遗传多样性和建立遗传图谱打下 基础．【方法】首先用单因素试验法对SRAP—PCR反应体系的5个主要影响因素(Mg“、dNTPs、引物、TaqDNA聚合 酶、模板DNA)各设8个浓度梯度进行试验 ，找到5个因素的适宜浓度范围，再采用均匀设计法进行5因素4水平 和5因素3水平的2轮优化．【结果和结论】建立了剑豆SRAP—PCR最佳反应体系(25 )：Mg 1．75mmol／L， dNTPs200Ixmol／L，引物0．36Ixmol／L，TaqDNA聚合酶0．06U／I~L，模板 DNA40ng．所建立的体系稳定可靠，适用 于剑豆后续的SRAP分析． 关键词：剑豆；SRAP—PCR；均匀设计；优化 中图分类号：$643．2 文献标志码：A 文章编号：1001—411x(2015)01—0075—04 EstablishmentandoptimizationofSRAP-PCRsystem inCanavaliaensifo删 LIUMingqian，CHENLijun，OU—YANGKunxi，DINGMeimei，CHENXiaoyang (1CollegeofForestry，SouthChinaAgriculturalUniversity／GuangdongKeyLaboratoryfor InnovativeDevelopmentandUtilizationofForestPlantGermplasm，Guangzhou510642；2CenterforTeaching ResearchBase，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China) Abstract：【Objective】ThepurposeofthisstudyistoestablishtheSRAP-PCRreactionsystemfor Canavaliaensfiormis． 【Method】Anoptimizationexperimentwithsinglefactordesignwasconducted， comprisingfivefactorsofTaqDNA polymerase，Mg2 primer，dNTPsandDNA template，eachwith ， eightconcentrationlevels，aimingtoscreentheirsuitableconcentrationrange．Afterthat，uniform design U16(4)andU12(3)wereoperatedinordertoimprovetheaccuracy． 【Resultandconclusion】There． sultsshowedthattheoptimum SRAP—PCR system wasestablished，includingMg2 1． 75mmol／L，dNTPs 200Ixmol／L，primers0．36~moL／L，