乙型肝炎病毒疫苗免疫不应答群体中蛋白质组表达差异性de初步研究【精选】.pdfVIP

生 感染 JournalofMicrobesandInfections，September25，2014，9(3)：139—146 http：∥jmi．fudan．edu．en ·139 · · 论 著 · 乙型肝炎病毒疫苗免疫不应答群体 中蛋 白质组表达差 异性的初步研究 常晓月 ，朱嗣博 ，高学鹏 ，朱玮。，朱乃硕 ， 1．复旦大学生物医学研究院，上海 200032；2．复旦大学生命科学学院，复旦大学遗传工程国家重点实验室， 上海 200433 摘 要：以往研究显示，人群中约有 10％无法通过接种乙型肝炎病毒 (HBV)疫苗而产生保护性水平的应答。 为研究HBV疫苗免疫后不应答发生 的机制，本研究对 108例经正常免疫程序 (大连汉信产 HBV 疫苗， 10 g／支，共接种 3针)后不同应答水平人群的血浆蛋白质组差异进行分析，将其分为无应答 (抗体效价检测 结果为阴性)组和高应答 (抗体效价约1000mIU／m1)组。用多重亲和去除系统 (MARS)亲和柱去除14种高 丰度蛋白后，采用双向荧光差异电泳 (2D．DIGE)与基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱 (MALDI—TOF- MS)相结合的方法，鉴定获得 11种差异表达蛋白质。在这些差异表达蛋白质中，1微球蛋白、激肽原 1的表 达在无应答人群中较高应答人群上调 ，而 a1抗胰凝乳蛋 白酶、维生素D结合蛋白、afamin、抗凝血酶Ⅲ和玻 连蛋白表达下调。其中，a1抗胰凝乳蛋白酶、激肽原 1和 1微球蛋白的差异性表达进一步得到酶联免疫吸 附试验 (ELISA)或蛋白免疫印迹法验证。以上蛋白质的表达情况与HBV疫苗免疫应答状况相关，可能成为 检测 HBV疫苗免疫应答水平的分子标记，为进一步研究免疫不应答机制奠定基础。 关键词：双向荧光差异凝胶电泳 ；分子标记 ；乙型肝炎病毒疫苗；血清；免疫不应答 Prelim inary proteom ic analysis of differentially expressed proteinsidentified by two--dimensionalfluorescence difference gelelectr0ph0resisforhepatitisB virusvaccinen0nresp0nders CHANG Xiao—Yue ，ZHU Si．Bo ，GAO Xue．Peng ，ZHU W ei，ZHU Nai-Shuo， 】．InstitutesofBiomedicalSciences，FudanUniversity，Shanghai200032，China；2．StateKeyLaboratory ofGeneticEngineering，SchoolofL Sciences，FudanUniversity，Shanghai200433，China Abstract：ThereiSaround10％ peoplewhocan’tproducesufficientantibodyafterhepatitisB virus(HBV) vaccineinjection．Inordertofindthemechanism ofHBVvaccinenon．responsiveness。108volunteerswere unifiedinjectedwithHBVvaccine(10ttg／shot)threetimes．Theyweredividedintonon．responderswith negativeHBVsurfaceantibody(HBsAb)titerandhighresponderswithHBsAbtitreabout1000mIU／m1． Theplasmaproteomewasanalyzed bytwo—dimensionalfluorescencedifferencegelelectroDhoresis(2D- DIGE)technologyafterdepletionof14highabundantproteinsbymultipleaffinityremovalsystem (M ARS) COlumn．11differentially expressedproteinswere identified bymatrix．assistedlaserdesorption／ionizatiOn time of flight mass spectrometry (M