小立碗藓冷驯化相关基因Pp-LIM onlyA的克隆与表达.pdfVIP

生 物 工程 学 报 ChinJBiotech2008，November25；24(11)：1867-1873 journals．im．ac．ca ChineseJournalofBiotechnology ISSN 1000—3061 cjb@im．ac．ca @ 2008InstituteofMicrobiology,CASCSM,Allrightsresewed 小立碗藓冷驯化相关基因 ．LIMonlyA的克隆与表达 孙铭明1,2，马荣才 ，何奕昆 1首都师范大学 初等教育学院，北京 100080 2首都师范大学 生命科学学院，北京 100048 3北京市农业生物技术研究中心，北京 100089 摘 要：植物经历冷-Sill4~后抗冻能力会有所提高。利用cDNA—AFLP方法从经过 0。C冷驯化处理的小立碗藓中筛选到差 异表达的 一L onlyA基 因片段。cDNA和基 因序列比较分析表明此基 因含有 7个 内含子和 8个外显子，编码由345 个氨基酸残基组成的蛋白质，其 中只含有一个 LIM结构域，与动物蛋白质 PDZ／LIM 家族有很高的同源性，推测是一种 新的植物 LIM蛋 白。实时定量PCR分析显示其在冷驯化6h后表达量即开始明显增加，并随着冷驯化时间的延长表达 量大幅度提高。Pp—LIMonlyA蛋白可能通过LIM 结构域对细胞骨架的作用而影响 了细胞膜的稳定性，本研究对其在抗 冻中的作用作 了进一步讨论 关键词：小立碗藓，冷驯化，L[MonlyA基 因，cDNA—AFLP,实时定量 PCR IsolationandIdentificationofa --LIM onlyA Gene ExpressedDuringColdAcclimationinPhyscomitrellapatens M ingmingSun ，RongcaiM a。andYikunHe2 ， 1CollegeofElementaryEducation，CapiatlNormalUniversi0，，Bering100080，Chnia 2CollegeofLifeScience，CapitalNomralUniversity，Beijing100048，China 3BeijingAgro—biotechnologyResearchCenter，Beijing100089，China Abstract：Coldacclimationcanimproverfeezingtolerance．HerecDNAamplifiedrfagmentlengthpolymorphism (cDNA—AFLP) wasusedtoisolatedifferentiallyexpressedcDNAsandaPp一．L onlyAcDNA wasisolatedandidentifiedinthecoldacclimationof Physcomitrellapatens．Real—timeRT-PCR indicated itisobviouslyup—regulatedat6h，12h，24h，48h nad 72h aftercold acclimation．AtiercomparingthecDNA withthegenesequence．sevenintronsandeightexonswereidentifiedinthecDNA．The cDNA putativelyencodesaproteinof345aminoacidresiduesna donlycont~asoneLIM domainwhichhashighlysimilaritywith thePDZ／LIM domainsoftheproteinfamilyinanimals．W proposedthatPp—Lm onlyAbeanew genecodingfortheLIM—domain containingproteinandenhancestabilityofcellmembraneviatheireffectsoncytoskeletonduringcoldacclimationin patens． Keywords：Physc