响应面法优化茶氨酸生物合成基因工程菌发酵条件的研究.pdfVIP

维普资讯 ※生物工程 良 晶科 宇 2OO8．0|1．29．No．06 243 响应面法优化茶氨酸生物合成基因工程菌 发酵条件的研究 陆文渊 ，成 浩 ，王丽鸳 ，周 健 (农业部茶叶化学工程重点实验窜，中国农业科学院茶叶研究所，浙江 杭州 310008) 摘 要：本实验对具有茶氨酸生物合成能力的v．谷氨酰转肽酶(v．GGT)基因工程菌的发酵条件进行了优化。旨先 采用Plackett．Burman实验设计对影响v．GGT活性的基因工程菌发酵条件进行筛选。然后将筛选得到的初始pH、培 养时间、异丙基硫代 ．B．D．半乳糖苷(isopropylthio．B．D．galactoside，mTG)诱导温度 3个关键影响因素进行响应面分 析 ，通过对二次多项回归方程求解得到该基因工程菌的最佳培养条件为初始pH7．32、培养时间6．67h、IPTG 31．5l℃诱导。v．GGT活性的最大预测值为4．60U／ml，实验验证值为4．64U／ml。最后通过基因工程菌催化合 成茶氨酸反应，得到茶氨酸的产量为35．18g／L。 关键词 ：茶氨酸；v．谷氨酰转肽酶(v．GGT)；Plackett．Burman设计；响应面法(RSM) ResponseSurfaceMethodologyforOptimizationofFermentationConditionsofGeneticallyEngineered EscherichiacoliStrainforBiosynhtesisofTheanine LU W en—yuan，CHENG Hao ，W ANG Li—yuan，ZHOU Jian (KeyLaboratoryofTeaChemicalEngineering，MinistryofAgriculture，TeaResearchInstitute，ChineseAcademyof AgriculturalSciences，Hangzhou 310008，China) Abstract：Thisexperimentstudiedtheoptimizationoffermentationconditionsofhtegeneticallyengni~redEscherichiacoli sllaJnofv-glutamyltranspeptidasey-EGTforhtebiosynhtesisofhteanine．ThesignificanteffectsofinitialpH，cultivationtime nadIFFGniductiontemperatureonhteactivityofV—GGTwerenotedwihtPlackett—Burmna design．Ithtenrevealde wihthte mehtodofresponsesurfacemehtodology(RSM)htatniitialpH7．32，cultivationtime6．67hnadIFFGinductiontemperature 31．5l℃raeoptimumofrtheactiviytofV—GGT，wihtapredictde V—GGTactiviyt 460Um／l，nadhteexperimentalV—GGT activiyt4．64Um／1．Th eyieldofhteaninefromL—Ginnadehtylamineis35．18glL． Keywords：hteanine； v·glytamyltranspeptidase(v—GGT)；Plackett·Burmandesign；responsesurfacemehtodology (RSM) 中图分类号：TS201．3